权益分类	功能权益	普通用户	{{item.name}}会员
{{category.name}}	{{benefitItem.name}}

ニコチンとLPSが破骨細胞前駆細胞の機能発現に及ぼす影響

尼古丁和脂多糖对破骨细胞前体细胞功能表达的影响

基本信息

批准号：
18890203
负责人：
田中秀樹
金额：
$ 1.77万
依托单位：
Nihon University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Young Scientists (Start-up)
财政年份：
2006
资助国家：
日本
起止时间：
2006 至 2007
项目状态：
已结题

项目摘要

破骨細胞前駆細胞としてマウス由来株化単球/マクロファージRAW264.7細胞を用いた。破骨細胞の形成は、酒石酸耐性酸ホスファターゼ染色キットで細胞を染色して調べた。RAW264.7細胞のニコチン受容体(α3およびα7type)、RANKL受容体(RANK)、マクロファージコロニー刺激因子受容体(c-fms)、酸産生を担う炭酸脱水酵素II型、骨基質タンパク分解を担うマトリックス金属プロテアーゼ(MMP)-9およびカテプシンKの遺伝子およびタンパク発現は、それぞれreal-time PCR法およびELISA法/Wester blot法で調べた。ニコチン刺激後の細胞内シグナル伝達因子(ERK)のリン酸化は、Western blot法で調べた。破骨細胞前駆細胞のニコチン受容体では、α7typeの受容体は検出されたが、α3typeは検出されなかった。α7type受容体発現には、ニコチン刺激の影響はほとんど認められなかったが、ERKのリン酸化はニコチン刺激によって顕著に増加した。また、ニコチン刺激によって増加したERKのリン酸化は、その阻害剤(PD98059)の添加によってコントロールレベルまで低下した。これらの結果から、ニコチンはRAW264.7細胞のα7typeのニコチン受容体に結合後、ERKを介してそのシグナルが伝達されることが示唆された。RAW264.7細胞のRANKおよびc-fmsの発現には、ニコチン刺激の影響はほとんど認められなかった。また、ニコチン刺激によって、RAW264,7細胞の炭酸脱水酵素II型の発現は増加したが、MMP-9およびカテプシンKの発現は低下した。これらの結果は、ニコチンが破骨細胞前駆細胞の機能発現とくに酸産生に深く関与していることを示しており、ニコチンは炭酸脱水酵素II型の発現増加を介して間接的に骨吸収を促進することが示唆された。

The osteoclast precursor cells were isolated from the RAW264.7 cells. Osteoclast formation, tartaric acid tolerance, staining, cell RAW264.7 cells were identified by: α3-α7type receptor, RANKL receptor (RANK), c-fms receptor, acid producing enzyme type II, MMP-9 - 9- The expression of ERK was detected by Western blot and the expression of ERK was detected by PCR. Osteoclast precursor cells contain alpha 7type receptors and alpha 3type receptors.α7-type receptor development, ERK acidification, and stimulation In addition, ERK activity was increased due to the addition of an inhibitor (PD98059). After binding to the α7-type receptor of RAW264.7 cells, ERK expression in RAW264.7 cells was detected. RAW264.7 cells RANK The expression of carbonic acid dehydratase type II in RAW264,7 cells was increased, and the expression of MMP-9 was decreased. The results showed that the increase in the production of carbonic acid dehydrase type II mediated the function of osteoclast precursor cells and the promotion of bone resorption indirectly.