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ヒトサイトメガロウイルスを中和するヒトモノクローナル抗体の機能解析

中和人巨细胞病毒的人单克隆抗体的功能分析

基本信息

批准号：
19790745
负责人：
太田茜
金额：
$ 2.42万
依托单位：
Fujita Health University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
财政年份：
2007
资助国家：
日本
起止时间：
2007 至 2008
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-19790745/
关键词：
モノクローナル抗体抗体ライブラリーヘルペスウイルス

项目摘要

1.中和抗原への結合力(反応速度論的解析)単離クローンは、VHのアミノ酸配列により14種(H0l〜H14)に分類でき、14種はすべて中和抗原gBの膜外領域組換えタンパクgB654に対して結合活性を示した(ELISA法)。そのうち7種(H02,H03,H04,H05,H08,H09,H14)について、SPR(表面プラズモン共鳴)法を利用した反応速度論的解析を行ない、いずれもgB654に対して強い結合力(K_D=9.2-0.53(nM))を示した。2.エピトープ解析結合力が明らかとなった7種のクローンが認識するgB654分子上のエピトープを簡便に分類するため、SPR法で任意の2抗体の競合実験を行なった。その結果、H05とH09,H05とH14の組み合わせでは互いの結合が他の結合を阻害せず、それぞれ異なるエピトープを認識していることが示唆された。全ての組み合わせによる実験の結果、7種の抗体は3グループ(a:H05,b:H09,H14,c:H02,H03.H04,H08)に分類された。3.中和活性解析14種のクローンはFabl価の抗体では、いずれも中和活性を示さなかった。そこで、7種のうちの3種(H05,H08,H14)について、遺伝子組換えによりIgG型抗体を作製したところ、50μg/mlで50%プラーク抑制を示す程度の中和活性を示した。現在、さらに4種(H02,H03,H04,H09)のIgG抗体を作製しており、それらの中和活性についても評価する予定である。

1. Binding power of neutralizing antigen (analysis of reaction rate theory) was shown by ELISA method. The binding activity of neutralizing antigen gB was determined by 14 kinds of acid alignment (H01 ~ H14). 7 kinds (H02, H03, H04, H05, H08, H09,H14) were analyzed by SPR(Surface Resonance) method using inverse velocity theory, and the strong binding force (K_D=9.2-0.53(nM)) was shown. 2. The binding force of 7 kinds of antibodies was analyzed by SPR method, and the binding force of 2 kinds of antibodies was analyzed by SPR method. The result is that H05 and H09, H05 and H14 are combined to form a mixture. 7 kinds of antibodies were classified into 3 groups (a: H05,b: H09,H14,c: H02, H03.H04, H08). 3. Neutralization activity analysis of 14 kinds of antibodies against Fabl Three of the seven species (H05, H08,H14) were tested for IgG-type antibody inhibition at 50 μg/ml and 50% inhibition at 50μg/ml. Currently, four IgG antibodies (H02, H03, H04, H09) are produced and evaluated for neutralizing activity.