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3型タンパク質分泌装置の分泌タンパク質選択性に関する研究

3型蛋白分泌仪分泌蛋白选择性的研究

基本信息

批准号：
19890119
负责人：
明田幸宏
金额：
$ 1.97万
依托单位：
Osaka University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Young Scientists (Start-up)
财政年份：
2007
资助国家：
日本
起止时间：
2007 至 2008
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-19890119/
关键词：
3型タンパク質分泌装置腸炎ビブリオシャペロン

项目摘要

細菌の3型タンパク質分泌装置(TTSS)のタンパク質分泌メカニズムは未だ不明な点が多いが、effector-chaperoneとATPaseの結合がeffector分泌には重要であり、このaffinityによってeffector分泌が調節されている可能性が考えられている。また複数個のTTSSから特定のTTSSを選択し、それを介して分泌されていくのかは、未だ不明であり、これを解明するために腸炎ビブリオの保有する3型タンパク質分泌装置(TTSS)によって分泌されるeffectorとそれに必須のシャペロンの同定を試みた。腸炎ビブリオTTSSの発現条件下の分泌タンパク質(effectorを含む)を二次元電気泳動で分離し、それぞれについてアミノ酸シークエンスを行い、同定を行った。いくつかのeffectorをこれによって同定し、これに付随するchaperoneについては、これまでの研究からその分子量、pI、ゲノム上の局在(effector遺伝子とchaperone遺伝子はゲノム上で隣接していることが多い)からある程度どの遺伝子がそれぞれのeffectorのchaperoneであるか推測されるので、それぞれについてクローニングし、実際にeffectorに対してchaperone機能を有するかどうかを確認した。またGST pulldown assayを行い、effectorとの結合性を確認した。さらにchaperone候補遺伝子欠損腸炎ビブリオ株を作成後、それぞれのchaperoneに対するeffectorの発現、分泌を確認した。chaperoneの転写調節機能の可能性についてはeffector遺伝子に百日咳毒素遺伝子を融合させた変異株を作製し、chaperoneの有無によってeffctor遺伝子の発現がどのように変化するか確認した。

Bacterial type 3 ATPase secretion apparatus (TTSS) is an important factor in the regulation of enzyme secretion. A plurality of TTSS are selected, and the secretion is performed in the presence of a specific TTSS. The identification of TTSS is performed in the presence of a type 3 TTSS secretion device (TTSS). The secretion of TTSS under the condition of enteritis is separated by two-dimensional electrokinetic reaction, and the secretion of TTSS is separated by two-dimensional electrokinetic reaction. The molecular weight, pI, and molecular weight of the compound are determined by the following factors: (Effector and chaperone) Effector and chaperone function are not available.(Effector and chaperone function are available.) GST pulldown assay, effector, and combination are confirmed. After the chaperone candidate is created, the chaperone effector is identified. Chaperone's ability to regulate the function of the gene is determined by the fusion of the effector gene and the pertussis toxin gene.