ユビキチン修飾を解読　（デコード）する技術の開発

开发解码泛素修饰技术

• 批准号: 14J11377
• 负责人: 土屋 光
• 金额: $ 1.22万
• 依托单位: The University of Tokyo
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for JSPS Fellows
• 财政年份: 2014
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2014-04-25 至 2016-03-31
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-14J11377/
• 关键词: 蛋白質分解

ユビキチン修飾の構造は、「ユビキチン鎖の種類」、「長さ」、「複雑さ」の3つの要素から成り立つ。「種類」・「複雑さ」については質量分析計や特異的抗体により識別が可能となってきたが、生体試料のような微量サンプルから検出し定量することは困難である。また、「長さ」の解析法はこれまで存在せず、そのためにユビキチンシグナルの発動原理には不明な点が多く残されている。申請者は、ユビキチン鎖結合プローブによるユビキチン鎖の捕捉・保護及び、トリプシン消化を組み合わせることによりユビキチン鎖長を決定する手法（Ub-ProT法: Ubiquitin chain-Protection from Trypsinization）を考案し、生体試料におけるユビキチン鎖長の解析を試みた。モデル系として出芽酵母細胞内に存在するグローバルなユビキチン化基質についてユビキチン鎖長決定を試みた。その結果、増殖細胞では基質タンパク質に平均2~6個のユビキチン鎖が結合していることが明らかとなった。「ユビキチン鎖の長さと種類の関係」を明らかにするため酵母ライセートからUb-ProT法により得られたサンプルを分子量により分画し、質量分析計を用いて主要な5種類のユビキチン鎖を絶対定量した。この結果、ユビキチン鎖の種類によりユビキチン鎖の長さが異なることか本研究により初めて明らかとなった。さらに、プロテアソームの上流でユビキチン基質の仕分けに関与するシャペロン様分子Cdc48/p97変異体中ではすべての種類のユビキチン鎖の長さが伸長していることが明らかとなった。

The three elements of "",""," "Species" and "complex" include mass analysis, detection of specific antibodies, identification of possible, and quantification of trace amounts of biological samples. The analysis method of "long" is that there are many unknown points in the mechanism of "long". The applicant shall examine the case and try to analyze the length of the biquitin chain-Protection from trypsinization (Ub-ProT method) in combination with the capture, protection and digestion of the biquitin chain-Protection from Trypsinization. The cell length of budding yeast is determined by the presence of a substrate. The results showed that the growth cells had an average of 2 - 6 cells in the matrix. "The relationship between the length and the type of the chain" is clearly stated. The Ub-ProT method is used to obtain the molecular weight of the chain. The results of this study show that the type of the lock is different from that of the lock. In addition to the above, there are also a number of different molecules Cdc48/p97.

项目成果

ユビキチン結合タンパク質のポリユビキチン鎖選択性解析

泛素结合蛋白的多泛素链选择性分析

• 发表时间: 2014
• 作者: 中村 正明, 汪 正元;中村 正明, 汪 正元;土屋光
• 通讯作者: 土屋光

Analysis of polyubiquitin chain selectivity of ubiquitin-binding proteins

泛素结合蛋白的多泛素链选择性分析

• 发表时间: 2014
• 作者: 中村 正明, 汪 正元;中村 正明, 汪 正元;土屋光;Hikaru Tsuchiya
• 通讯作者: Hikaru Tsuchiya