Analyse der alpha-Amanitin-resistenten Transkription und der Antigenen Variation bei Trypanosoma brucei

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Der einzellige Parasit Trypanosoma brucei besitzt einen aus identischen Molekülen aufgebauten Glykoproteinmantel, der ihn vor lytischen Komponenten der Wirtsorganismen schützt und durch dessen antigene Variation der Parasit der Säugetier-Immunantwort entkommt. Die Proteine - GPEET- und EP-Procycline in der Insektenform und "Variant Surface Glycoprotein" (VSG) in der Blutstromform - werden von Genen kodiert, deren Traskription resistent gegebenüber a-Amanitin ist. Die RNA Polymerase I, für die diese Eigenschaft charakteristisch ist, transkribiert sonst ausschließlich die ribosomale DNA. Für die Analyse dieser einmaligen Konstellation in T. brucei haben wir ein in vitro-System entwickelt, in dem a-Amanitin-resistente Transkription an rDNA, GPEET und VSG Promotoren effizient und korrekt gestartet wird. Wir werden damit die für die Transkription verantwortliche RNA Polymerase, ihre Komponenten sowie Transkriptionsfaktoren identifizieren und funktionell charakterisieren. Der Schwerpunkt soll auf Faktoren liegen, die spezifisch mit dem GPEET oder dem VSG Promotor interagieren, da es für sie vermutlich kein Gegenstück in den Wirtsorganismen gibt. Um Aufschluß über den Mechanismus der Antigenen Variation zu bekommen, werden wir durch eine Kombination von Immunfluoreszenz und in situ-Hybridisierung RNA Polymerase I und die aktive VSG Expressionsstelle im Zellkern lokalisieren.