gp91phox遺伝子に対するsiRNAを用いた心不全に伴う心室性不整脈の治療

使用针对 gp91phox 基因的 siRNA 治疗与心力衰竭相关的室性心律失常

基本信息

批准号：
19659205
负责人：
中村一文
金额：
$ 1.66万
依托单位：
Okayama University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Challenging Exploratory Research
财政年份：
2007
资助国家：
日本
起止时间：
2007 至 2009
项目状态：
已结题

项目摘要

検討1 【目的】心不全患者の心筋において、酸化ズトレス発生が亢進している。中でも過酸化脂質の最終代謝産で、有害アルデヒドである4-Hydroxy-2-nonenal(HNE)が拡張型心筋症患者ならびに拡張相肥大型心筋症患者の不全心筋に蓄積している事を我々は報告してきた(Nakamura K, et al. Circulation2002, J Card Fai1 2005)。今回我々は、HNEが活性酸素発生を介して心筋内カルシウム濃度を増加させると仮定して、実験を行った。【方法】成人ラットの単離心筋においてHNEが活性酸素を発生させるかどうか2',7'-dichlorofluorescin diacetate fluorescence(DCF)を用いて検討した。fura-2を用いて心筋細胞内カルシウム濃度を測定した。【結果】(1)DCF用いて検討したところ、HNE(10 to 100μmol/L)によって、濃度依存性に螢光強度が増強した。すなわち活性酸素が発生した。その発生はNADPH oxidaseの阻害剤(Diphenyleneiodinum : DPIならびにApocynin)によって抑制された。(2)次に、fura-2を用いて心筋細胞内カルシウム濃度を測定した。病的状態に発生しうる高濃度のHNE(400pmol/L)は、心筋において時間依存性に心筋細胞内カルシウム濃度を増加させた。そして最終的に67%の細胞においてhypercontractureをひきおこした。(3)抗酸化酵素であるカタラーゼと、抗酸化作用をもつβ遮断薬であるカルベジロールは心筋細胞内カルシウム濃度増加を有意に減弱させ、hypercontractureの発生を抑制した。抗酸化作用のないβ遮断薬であるプロプラノロールはCa濃度の増加を減弱させなかった。更にL型Ca遮断薬であるverapamilならびにNa/Ca exchanger(NCX)のリバースモードの阻害剤であるKB-R7943も心筋細胞内Ca濃度増加を一部抑制した。【考案】心不全患者の心筋において、酸化ストレス発生が充進しており、その産物であるHNEは、NADPH oxidase由来の活性酸素発生を介して心筋細胞においてCa過負荷を引き起こした。検討2【目的】実際にHNEが心室性不整脈・心室細動(VF)に関与するかどうかBrugada症候群の心筋組織において検討した。【方法】Brugada型心電図の患者の心筋組織におけるHNEeの量とVFの発症について検討する。【結果】SCN5A遺伝子変異を持たない患者においてはVFの有無と心筋HNEの量に関係がなかったが、SCN5A遺伝子変異を持つ患者においては、VF既往患者の方が既往のない患者にくらべ、HNE量が多かった。【考案】Brugada症候群患者において、VF陽性例の心筋で酸化ストレスが増大していた。酸化ストレスがVF発症に関与する可能性が考えられた。上述の結果は、Cardiovasc Pathol(In press)にて報告した。

研究1 [客观]心力衰竭患者心肌心肌的氧化zutress发育增加。 Among them, we have reported that the harmful aldehyde 4-Hydroxy-2-nonenal (HNE) is the final metabolite of lipid peroxide, and that the harmful aldehyde is accumulated in the failed myocardium of dilated cardiomyopathy patients as well as dilated phase hypertrophic cardiomyopathy (Nakamura K, et al. Circulation2002, J Card Fai1 2005）。在这里，我们进行了一个实验，假设HNE通过活性氧增加了心脏内钙浓度。 HNE是否使用2'，7'-二氯氟乙醇二乙酸酯荧光（DCF）研究了HNE是否在成年大鼠的分离心肌中产生活性氧。使用Fura-2测量心脏内肌细胞钙浓度。 [结果]（1）使用DCF检查时，HNE（10至100μmol/L）以浓度依赖性方式增加了荧光强度。换句话说，产生活性氧。 NADPH氧化酶抑制剂（二甲基二烯二选择素：DPI和apocynin）抑制了它的发育。（2）接下来，使用Fura-2测量了心内肌细胞钙浓度。在病理条件下可能发生的高浓度的HNE（400 pmol/L）以时间依赖的方式增加了心肌内心肌内钙的浓度。最后，在67％的细胞中产生了超合同。（3）过氧化酶，一种具有抗氧化特性的β受体阻滞剂的抗氧化剂酶和卡维地醇，显着减弱了心肌细胞钙浓度的增加并抑制了超额合同的发展。普萘洛尔是一种没有抗氧化特性的β受体阻滞剂，并未减弱Ca浓度的增加。此外，L型CA阻滞剂Verapamil和KB-R7943是Na/Ca交换器（NCX）反向模式的抑制剂（NCX），也部分抑制了心肌细胞CA浓度的增加。 [设计]心力衰竭患者心肌心肌的氧化应激发育很高，HNE的产物通过产生源自NADPH氧化酶的活性氧导致心肌细胞中的CA过载。研究2 [目的]我们研究了HNE是否在Brugada综合征的心肌组织中是否在心室心律不齐和心室纤颤（VF）中起作用。方法：我们研究了Brugada心电图患者的心肌组织中HNEE的量和VF的发作。 [结果]在没有SCN5A基因突变的患者中，VF的存在或不存在与心肌HNE的数量之间没有关系，但是在SCN5A基因突变的患者中，VF病史患者的HNE量比没有任何历史的患者高。 [设计]在Brugada综合征患者中，在VF阳性病例中心肌中氧化应激增加。人们认为氧化应激可能与VF的发展有关。上述结果报道了心脏的病理（印刷中）。