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gp91phox遺伝子に対するsiRNAを用いた心不全に伴う心室性不整脈の治療

使用针对 gp91phox 基因的 siRNA 治疗与心力衰竭相关的室性心律失常

基本信息

批准号：
19659205
负责人：
中村一文
金额：
$ 1.66万
依托单位：
Okayama University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Challenging Exploratory Research
财政年份：
2007
资助国家：
日本
起止时间：
2007 至 2009
项目状态：
已结题

项目摘要

検討1 【目的】心不全患者の心筋において、酸化ズトレス発生が亢進している。中でも過酸化脂質の最終代謝産で、有害アルデヒドである4-Hydroxy-2-nonenal(HNE)が拡張型心筋症患者ならびに拡張相肥大型心筋症患者の不全心筋に蓄積している事を我々は報告してきた(Nakamura K, et al. Circulation2002, J Card Fai1 2005)。今回我々は、HNEが活性酸素発生を介して心筋内カルシウム濃度を増加させると仮定して、実験を行った。【方法】成人ラットの単離心筋においてHNEが活性酸素を発生させるかどうか2',7'-dichlorofluorescin diacetate fluorescence(DCF)を用いて検討した。fura-2を用いて心筋細胞内カルシウム濃度を測定した。【結果】(1)DCF用いて検討したところ、HNE(10 to 100μmol/L)によって、濃度依存性に螢光強度が増強した。すなわち活性酸素が発生した。その発生はNADPH oxidaseの阻害剤(Diphenyleneiodinum : DPIならびにApocynin)によって抑制された。(2)次に、fura-2を用いて心筋細胞内カルシウム濃度を測定した。病的状態に発生しうる高濃度のHNE(400pmol/L)は、心筋において時間依存性に心筋細胞内カルシウム濃度を増加させた。そして最終的に67%の細胞においてhypercontractureをひきおこした。(3)抗酸化酵素であるカタラーゼと、抗酸化作用をもつβ遮断薬であるカルベジロールは心筋細胞内カルシウム濃度増加を有意に減弱させ、hypercontractureの発生を抑制した。抗酸化作用のないβ遮断薬であるプロプラノロールはCa濃度の増加を減弱させなかった。更にL型Ca遮断薬であるverapamilならびにNa/Ca exchanger(NCX)のリバースモードの阻害剤であるKB-R7943も心筋細胞内Ca濃度増加を一部抑制した。【考案】心不全患者の心筋において、酸化ストレス発生が充進しており、その産物であるHNEは、NADPH oxidase由来の活性酸素発生を介して心筋細胞においてCa過負荷を引き起こした。検討2【目的】実際にHNEが心室性不整脈・心室細動(VF)に関与するかどうかBrugada症候群の心筋組織において検討した。【方法】Brugada型心電図の患者の心筋組織におけるHNEeの量とVFの発症について検討する。【結果】SCN5A遺伝子変異を持たない患者においてはVFの有無と心筋HNEの量に関係がなかったが、SCN5A遺伝子変異を持つ患者においては、VF既往患者の方が既往のない患者にくらべ、HNE量が多かった。【考案】Brugada症候群患者において、VF陽性例の心筋で酸化ストレスが増大していた。酸化ストレスがVF発症に関与する可能性が考えられた。上述の結果は、Cardiovasc Pathol(In press)にて報告した。

Objective: To explore the mechanism of heart failure in patients with heart failure. The final metabolic production of hyperacidified lipids and the harmful effects of 4-Hydroxy-2-nonenal(HNE) in patients with dilated cardiomyopathy and hypertrophic cardiomyopathy have been reported (Nakamura K, et al. Circulation2002, J Card Fai1 2005). Now, HNE can be produced by increasing the concentration of HNE in the muscle. [Methods] Adult centrifuge tube HNE active acid generation was investigated using 2',7'-dichlorofluorescin acetate fluorescence(DCF). Fura-2 was used to determine the intracellular concentration of fura-2 in the heart muscle. [Results](1) Fluorescence intensity of DCF and HNE(10 to 100μmol/L) increased in a concentration-dependent manner. The active acid is produced. Diphenyleneimine: DPI and Apocynin are inhibitors of NADPH oxidase. (2)The intracellular concentration of fura-2 was measured in the heart muscle cells. The high concentration of HNE(400pmol/L) during the onset of the disease increased in a time-dependent manner. 67% of the cells are hypercontracted. (3)Anti-acidification enzyme activity is inhibited by increasing intracellular concentration of anti-acidification enzyme and inhibiting hypercontraction. Anti-acidification effect of β-blocking agent can be reduced by increasing Ca concentration. In addition, L-type Ca blocker KB-R7943 partially inhibited the increase of intracellular Ca concentration in cardiac muscle cells due to the presence of verapamil and Na/Ca exchanger(NCX). [Case] The production of active acids from NADPH oxidase in cardiac muscle cells is mediated by calcium overload in patients with cardiac insufficiency. Objective: To investigate the relationship between ventricular arrhythmia and ventricular fibrillation (VF) in patients with Brugada syndrome. [Methods] The amount of HNEe in the cardiac muscle tissue of patients with Brugada ECG and the development of VF were studied. [Results] SCN5A gene variation is related to the presence or absence of VF and the amount of HNE in the heart muscle. SCN5A gene variation is related to the presence or absence of VF and the amount of HNE in the heart muscle. In patients with Brugada syndrome, cardiac acidosis increased in VF positive cases. The possibility of acidification is discussed. The above results are reported in Cardiac Pathol(In press).