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キノコ類グルカナーゼの糖転移活性を利用した分岐型機能性βグルカン合成

利用蘑菇葡聚糖酶的转糖基活性合成支链功能性 β-葡聚糖

基本信息

批准号：
23780169
负责人：
金野尚武
金额：
$ 2.91万
依托单位：
Iwate Biotechnology Research Center
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
财政年份：
2011
资助国家：
日本
起止时间：
2011 至 2013
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-23780169/
关键词：
バイオマス酵素反応糖鎖応用微生物森林工学

项目摘要

キノコ類に含まれるβグルカンの一部は抗腫瘍作用を示すが、精製が困難、構造が複雑で、モデル材料を合成する手段もない為、その作用に関する分子レベルでの解明が進んでいない。本研究では、キノコ類から単離したβグルカナーゼの糖転移活性を利用して、各種βグルカンを人為的にデザインする手法を確立することを目的とした。平成24年度は新たに担子菌スエヒロタケから糖質加水分解酵素（GH）ファミリー30に属するβ-1,6グルカナーゼ（ScPus30A）をクローニングし、こうじ菌（Aspergillus oryzae）で異種発現させた。SDS-PAGE上で分子量は57,000と推定された。他のGH30酵素群とのマルチアライメントから、207番目と302番目のグルタミン酸が活性中心残基であると予想された。そこで、それぞれについてアラニン、グリシン、セリンの変異体を作成し異種発現させた。これら変異酵素とフッ化糖（α-フッ化グルコピラノシド）を用いてβ-1,6グルカンの合成反応を検討したが、合成反応は認められなかったことから、本酵素群を用いた合成反応にはフッ化ゲンチオオリゴ糖が必要であると予想された。そこでオリゴ糖の合成用にイネいもち病菌のGHファミリー２種についても合成酵素化を行い計6種類の変異酵素を得た。これらを組み合わせることでβグルカンの酵素合成が可能になると考えられる。一方で、担子菌ウシグソヒトヨタケよりGHファミリー16に属する酵素をクローニングし、上記と同様にこうじ菌で異種発現させた。コンブ由来のβ-1,3/1,6グルカンであるラミナリンを本酵素で分解させたところ、主生成物としてβ-1,6結合でグルコース側鎖をもつβ-1,3グルカン3糖および4糖を得ることができた。これらオリゴ糖を材料に機能性グルカンを調製できる可能性がある。

The test type includes the effect of anti-virus, precision, replication, synthesis of materials, and molecular understanding of the effect. The purpose of this study is to determine the effect of β-glucose transfer activity by using the artificial methods of β-ray and β-ray. In Pingcheng 24, new basidiomycetes were tested by adding water-decomposing enzymes (GH) and water-decomposing enzymes (GH). 30 was classified as β-1, β-1, β-1, β-1, β-mycelia (ScPus30A) and Aspergillus oryzae. The molecular weight of "57000" on SDS-PAGE is presumed to be low. He said that the GH30 enzyme group, acid, active center residue, acid, active center residue, acid, acid, active center residue, acid, active center, acid, acid We need to make sure that all kinds of equipment are made into several kinds of equipment. The enzyme was used to synthesize the reverse sugar, and the enzyme group was used to synthesize the sugar. The enzyme group used the enzyme group to synthesize the sugar, the enzyme group, and the enzyme group. The synthesis of sugar by bacteria, GH, and the synthesis of 2 kinds of enzymes has been successfully performed. The combination of β-enzyme synthesis and β-enzyme synthesis may be very important. On the one hand, basidiomycetes are sensitive to GH. 16 is an enzyme-linked immunosorbent assay, and the same as that of other bacteria. The origin of this enzyme is to decompose it. The main product of this enzyme is to decompose it. The main product of this enzyme is called β-1. The main product, β-1, is obtained by combining the main product, β-1, with the combination of 4 sugars, 3 sugars. The function of the sugar material is very high. The possibility is very high.