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真菌類酵素による機能性きのこβグルカンのデザイン

利用真菌酶设计功能性蘑菇β-葡聚糖

基本信息

批准号：
13J10648
负责人：
金野尚武
金额：
$ 0.77万
依托单位：
Iwate Biotechnology Research Center
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for JSPS Fellows
财政年份：
2013
资助国家：
日本
起止时间：
2013 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

βグルカンの一部は免疫賦活機能を有することが知られている。関連研究および予備的実験から「β-1,6グルカン構造」が機能に重要であることが示唆された。本課題では担子菌由来のβ-1,6グルカナーゼを合成酵素化し、人為的にβ-1,6グルカンの酵素合成を試みた。本研究で得られる、β-1,6グルカンは機能性材料として期待できるのみならず、免疫賦活機構を解明するためのモデル材料としても用いることができる。また、得られる知見を基に高機能の新規有用グルカンを創製することも可能となる。まず、スエヒロタケ(ScPus30A)およびウシグソヒトヨタケのホモログ(CcPus30A)のβ-1,6グルカナーゼ遺伝子をクローニングし、こうじ菌(Aspergillus oryzae)で異種発現をさせた。SDS-PAGE上で分子量はCcPus30Aの分子量は50,000、ScPus30Aは57,000と推定された。本酵素群はエンド型のβ1,6グルカナーゼ活性を有し、β-1,6グルカンに対して高い基質特異性を示した。次にScPus30Aの合成酵素化を進めた。GH30酵素群とのマルチアライメントから、ScPus30Aでは207番目と302番目のグルタミン酸が活性中心残基であると予想された。そこで、それぞれにっいてアラニン(E207A、E302A)、グリシン(E207G、E302G)、セリン(E207S、E302S)の変異体を作成し、こうじ菌を用いて異種発現させた。フッ化ゲンチオビオース酵素反応の材料に用いた。20時間後の反応溶液を分析したところ、変異酵素E302Gで、出発物質の減少、3糖以上の生成が確認された。以上のことから、β-1,6グルカナーゼの合成酵素化に成功したと考えられた。今後は、β-1,6グルカン合成の最適化を図り、さらに長鎖を合成できるように条件検討していく。

β-ray can be used in one immune machine to know how to do it. In order to study the important information of the equipment, the "β-1, 6-year, 6-year" machine can be used to show that it is important. In this paper, the origin of Basidiomycetes was β-1, the synthesis of β-1, 6-amino acid, β-1, β-1, β-1, β-1, β-1, β-1, β-1, β-1, β-1, β-1, β-1, β-1 and β-1. In this study, the functional materials are expected to be used in this study, and the immune mechanism is used to understand that the materials are used. It is known that the base high-altitude aircraft can make use of the new rules and regulations and may be affected. There are many kinds of bacteria, such as bacteria, bacteria (Aspergillus oryzae), bacteria, bacteria. Molecular weight "CcPus30A" on SDS-PAGE, molecular weight "50000", ScPus30A "57000" presumed "molecular weight". The activity of this enzyme group is similar to that of β 1, β 1, β 1, β 1, β 1, β 1, β 1, β-1, β-1, β-1, β-1, β-1, β-1, β-1, β-1, β-1, β-1, β-1, β-1, β-1, β-1, β-1, β-1, β-1, β-1, β-1, and β-1. The enzyme synthesis of secondary ScPus30A was improved. GH30 enzyme group, ScPus30A, ScPus30A, acid, active center residue, acid, acid, The spores (E207A, E302A), the spores (E207G, E302G), the spores (E207S, E302S) were made, and the bacteria were tested with different strains. In this paper, the enzyme anti-enzyme is used to prepare the material. After 20 hours, the enzyme E302G, enzyme E302G, enzyme E30 The above synthetic enzymes were successfully digested and tested by β-1 ~ (- 1). In the future, β-1, β-1, and β-1, β-1, β-1, β-1, β-1, β-1, β-1, β-1, β-1, β-1, β-1, β-1, β-1, β-1, β-1, β-1, β-1, β-1, β-1, β-1, β-1, β-1, β-1, and β-1.