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近位尿細管エンドサイトーシスによる新規レニン・アンジオテンシン系活性化機構の解明

通过近端肾小管内吞作用阐明新型肾素-血管紧张素系统激活机制

基本信息

批准号：
23790934
负责人：
佐藤博慶
金额：
$ 2.75万
依托单位：
Niigata University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
财政年份：
2011
资助国家：
日本
起止时间：
2011 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

本研究の主目的は、腎近位尿細管細胞に発現するエンドサイトーシス受容体メガリンを介する新しいレニン-アンジオテンシン系の活性化機構を明らかにすることである。アンジオテンシンIIの前駆タンパクであるアンジオテンシノゲンは、糸球体を濾過した後、メガリンを介して近位尿細管上皮細胞に取り込まれることが知られている。本年度は、InvitrogenのFreeStyle MAX 293 Expression Systemを用いて、浮遊・高密度培養可能なHEK293細胞に、ヒトアンジオテンシノゲンおよびヒトプロレニンcDNA(Hisタグ付き)を組み込んだ発現ベクターをトランスフェクションし、無血清培地中にそれらの組換えタンパクを発現させた後、コバルトカラムで精製することにより、それらのタンパクを大量に精製することに成功した。上記の方法で作製した組換えヒトアンジオテンシノゲンとヒトプロレニンを、培養ラット近位尿細管上皮細胞(IRPTC)に添加したところ、細胞内に取り込まれたヒトアンジオテンシノゲンがヒトプロレニンにより切断されることを見出した。すなわちこれは、細胞内でヒトプロレニンが活性化されたことを示す。さらに、試験管内の反応において、酸性pH条件下でヒトプロレニンが活性化することを確認しており、IRPTC内のエンドソームの酸性pHによりプロレニンが活性化したものと考えられた。さらに、私が所属する新潟大学大学院医歯学総合研究科機能分子医学講座では高効率の腎特異的メガリンノックアウトマウスの作出に新たに成功した。このマウスの尿には大量のアンジオテンシノゲン(レニン未切断型)が存在することから、糸球体を濾過したアンジオテンシノゲン(レニン未切断型)が、メガリンを介して近位尿細管上皮細胞に取り込まれることが示唆された。

The main purpose of this study is to clarify the mechanism of activation of renal proximal urinary tubule cells. The first phase of the process is to filter out the cells in the proximal urinary tubule and to filter out the cells in the proximal urinary tubule. This year, Invitrogen's FreeStyle MAX 293 Expression System was used, floating and high-density culture was possible for HEK293 cells, and the gene expression and protein cDNA(His protein) were organized and developed. After the development of the gene expression in serum-free culture, the gene expression was refined. A large number of successful cases were reported. The method described above is to prepare and culture proximal urinary tubule epithelial cells (IRPTC), to add and remove impurities, and to remove impurities from cells. The cells are activated by the enzyme. In addition, it is confirmed that the reaction temperature in the test tube is high and the reaction temperature is high under acidic pH conditions. Department of Functional Molecular Medicine, Graduate School of Medical and Dental Sciences, Niigata University, Japan A large number of urine samples were collected from urine tubule epithelial cells (uncut type).

项目成果

期刊论文数量（0）

专著数量（0）

科研奖励数量（0）

会议论文数量（0）

专利数量（0）

Significance of urinary full-length and ectodomain forms of megalin in patients with type 2 diabetes.

DOI：
10.2337/dc11-1684
发表时间：
2012-05
期刊：
Diabetes care
影响因子：
16.2
作者：
Ogasawara S;Hosojima M;Kaseda R;Kabasawa H;Yamamoto-Kabasawa K;Kurosawa H;Sato H;Iino N;Takeda T;Suzuki Y;Narita I;Yamagata K;Tomino Y;Gejyo F;Hirayama Y;Sekine S;Saito A
通讯作者：
Saito A

糖尿病における微量アルブミン尿の機序～系球体・血管系と尿細管系の相互的関係の観点から～IN : Annual Review 2011「腎臟」

糖尿病微量白蛋白尿的机制——从球/血管系统与肾小管系统的相互关系角度看——IN：2011年年度回顾《肾花瓶》