無細胞発現系による抗H5N1ヒト型IgG抗体の発現と高中和活性化

本研究の目的は無細胞発現系を用いて臨床応用が可能なヒト型抗体を大量発現および単離する方法を確立することが目的である。平成23年度の研究実施計画を要約すると、(1)無細胞発現系を用いて迅速にヒト型IgGを大量発現させる。(2)IgG型にすることによりFabやscFvより中和活性を上昇させる。(3)抗体に変異を加えて新型のインフルエンザウイルスに対する抗体を多種類ストックする事である。T7プロモーターを5'側に配した抗H5N1インフルエンザウイルスScFv PCRフラグメントをPuresystem(無細胞発現系)にて発現させたところELISA法にてProtein L HRP、および抗HisタグHRP抗体にて有意な発現が確認された。ウエスタンブロット法においては非特異的なバンドが多数確認されScFv特異的なバンドは観察されなかった。1mlの無細胞発現系(Pureflex)を用いてHisタグを有するScFvタンパクを発現させCo^<2+>カラム(TALON)により精製した。精製されたタンパク量は約10μgであり、発現量はそれほど高くなかった。今後の課題としてシャペロンとの共発現による発現量の向上および大腸菌発現時における毒性の低い抗体を用いて無細胞発現実験を行うことなどが検討される。

本研究の目的は無細胞発現系を用いて臨床応用が可能なヒト型抗体を大量発現および単離する方法を確立することが目的である。平成23年度の研究実施計画を要約すると、(1)無細胞発現系を用いて迅速にヒト型IgGを大量発現させる。(2)IgG型にすることによりFabやscFvより中和活性を上昇させる。(3)抗体に変異を加えて新型のインフルエンザウイルスに対する抗体を多種類ストックする事である。T7プロモーターを5'側に配した抗H5N1インフルエンザウイルスScFv PCRフラグメントをPuresystem(無細胞発現系)にて発現させたところELISA法にてProtein L HRP、および抗HisタグHRP抗体にて有意な発現が確認された。ウエスタンブロット法においては非特異的なバンドが多数確認されScFv特異的なバンドは観察されなかった。1mlの無細胞発現系(Pureflex)を用いてHisタグを有するScFvタンパクを発現させCo^<2+>カラム(TALON)により精製した。精製されたタンパク量は約10μgであり、発現量はそれほど高くなかった。今後の課題としてシャペロンとの共発現による発現量の向上および大腸菌発現時における毒性の低い抗体を用いて無細胞発現実験を行うことなどが検討される。