鼻性NK/T細胞リンパ腫におけるケモカインおよびケモカインレセプターの解析

鼻NK/T细胞淋巴瘤趋化因子和趋化因子受体分析

基本信息

批准号：
23791869
负责人：
長門利純
金额：
$ 2.75万
依托单位：
Asahikawa Medical College
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
财政年份：
2011
资助国家：
日本
起止时间：
2011 至无数据
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-23791869/
关键词：
悪性リンパ腫 NK/T細胞ケモカイン EBウイルス

项目摘要

鼻性NK/T細胞リンパ腫の病態解明、新たな診断および治療開発のために、各種ケモカインとその受容体の発現および機能について、腫瘍細胞株および臨床検体を用いて検討した。鼻性NK/T細胞リンパ腫におけるケモカイン発現を網羅的に調べるために、本リンパ腫細胞株の培養上清を用いてケモカインアレイを施行した。鼻性NK/T細胞リンパ腫細胞株として、EBV陽性かつウイルス蛋白であるLMP-1陽性であるSNK6、SNT8、SNK1を用いた。対照として鼻性NK/T細胞リンパ腫以外のNK細胞株であり、EBV陰性であるKHYG1を用いた。その結果、鼻性NK/T細胞リンパ腫細胞株においてKHYG1より有意に発現が上昇しているケモカインとしてTARC、MDC、IL-8、MCP-1が同定された。TARCは3種類の鼻性NK/T細胞リンパ腫細胞株すべてでKHYG1と比較して発現上昇を認めた。MDCはSNK6とSNK1で、IL-8はSNT8とSNK1で、MCP-1はSNT8で発現上昇を認めた。これらのケモカイン産生はELISAによって確かめられ、鼻性NK/T細胞リンパ腫細胞株ではケモカインアレイの結果に一致して、TARCは3つの細胞株すべてにおいて、MDCはSNK6とSNK1で、IL-8はSNT8とSNK1で、MCP-1はSNT8でそれぞれ十分量の産生を認め、時間の経過と共にその産生量は増加した。その他のNK細胞株やNK細胞様T細胞株、T細胞株では、4種類のケモカインはほとんど産生を認めなかった。TARCとMDCの受容体であるCCR4、IL-8の受容体であるCXCR1とCXCR2、MCP-1の受容体であるCCR2の鼻性NK/T細胞リンパ腫細胞株における発現を調べるために、フローサイトメトリーを施行した。CCR4は3つの鼻性NK/T細胞リンパ腫細胞株すべてで発現を認めたが、CXCR1、CXCR2、CCR2は発現を認めなかった。患者血清中のケモカインの発現をELISAにて検討した。当科にて鼻性NK/T細胞リンパ腫と診断された14名の治療前血清を用い、比較対照として10名の健常人血清を用いた。その結果、患者血清において健常人血清と比較しTARC、MDC、IL-8、MCP-1の有意な発現上昇を認めた。クモカインアレイとELISA結果より、鼻性NK/T細胞リンパ腫細胞株では、TARC、MDC、IL-8、MCP-1が他のNK細胞株、NK細胞様T細胞株、T細胞株と比較して特異的に発現していることが示された。また、今回使用した細胞株で4種類のケモカインを産生している細胞株はEBV陽性LMP-1陽性細胞株であった。TARCとMDCはEBウイルス感染B細胞でLMP-1によって発現が誘導されるとの報告がある。IL-8は上咽頭癌でLMP-1によって発現が誘導され、血管新生に関与するとの報告がある。また、MCP-1も上皮細胞株でLMP-1によって発現が誘導されるとの報告がある。以上より、鼻性NK/T細胞リンパ腫細胞株における4種類のケモカイン産生にもEBウイルス感染が関連している可能性が考えられた。鼻性NK/T細胞リンパ腫患者血清おいて、健常人血清と比較し、TARC、MDC、IL-8、MCP-1の有意な発現上昇を認め、患者検体においても4種類のケモカインの存在が確認された。また、鼻性NK/T細胞リンパ腫細胞株において、TARCとMDCの受容体であるCCR4の発現も認められたことから、TARCとMDCに関しては今後オートクラインによる遊走能や浸潤能亢進などについて検討する必要があると考えられた。

为了阐明鼻腔NK/T细胞淋巴瘤，使用肿瘤细胞系和临床标本研究了各种趋化因子及其受体的表达和功能。为了全面检查鼻NK/T细胞淋巴瘤中的趋化因子表达，使用淋巴瘤细胞系的培养上清液进行趋化因子阵列。作为鼻NK/T细胞淋巴瘤细胞系，使用了EBV阳性和病毒蛋白，LMP-1阳性SNK6，SNT8和SNK1。作为对照，使用了除鼻NK/T细胞淋巴瘤和EBV阴性以外的NK细胞系KHYG1。结果，将TARC，MDC，IL-8和MCP-1鉴定为趋化因子，其表达显着增加，而鼻nk/T细胞淋巴瘤细胞系中的表达显着增加。与KHYG1相比，TARC在所有三个鼻腔NK/T细胞淋巴瘤细胞系中表现出现增加。 MDC为SNK6和SNK1，IL-8是SNT8和SNK1，而SNT8中的MCP-1增加。 ELISA证实了这些趋化因子的产生，并且与鼻NK/T细胞淋巴瘤细胞系中的趋化因子阵列的结果一致，TARC在所有三个细胞系中显示了足够的MDC，SNK6和SNK1，SNK1，IL-8在SNT8和SNT8和SNK1中的SNT8和SNT8中的MCP-1分别越来越多。在其他NK细胞系，NK细胞样T细胞系和T细胞系，几乎没有观察到四个趋化因子的产生。进行流式细胞仪，以检查鼻腔NK/T细胞淋巴瘤细胞系中MCP-1的CCR4，TARC和MDC，CXCR1和CXCR2的受体，IL-8的受体和CCR2的表达。 CCR4在所有三个鼻腔NK/T细胞淋巴瘤细胞系中均表达，而CXCR1，CXCR2和CCR2均未表达。 ELISA检查了患者血清中趋化因子的表达。使用了我们部门中诊断为鼻腔NK/T细胞淋巴瘤的14例患者的预处理血清，并将10个健康的单个血清用作比较对照组。结果，与健康的个体血清相比，在患者血清中观察到TARC，MDC，IL-8和MCP-1的表达显着增加。尖齿阵列和ELISA结果表明，与其他NK细胞系，NK细胞样T细胞系和T细胞系相比，在鼻NK/T细胞淋巴瘤细胞系中，TARC，MDC，IL-8和MCP-1在鼻NK/T细胞淋巴瘤细胞系中特异性表达。此外，细胞系使用这次产生四种类型的趋化因子是EBV阳性LMP-1阳性细胞系。据报道，在EB病毒感染的B细胞中，LMP-1诱导TARC和MDC的表达。据报道，IL-8是由LMP-1在鼻咽癌中诱导的，并参与血管生成。还报道了MCP-1的表达是在上皮细胞系中LMP-1诱导的。从以上，可以认为EB病毒感染也可能与鼻内NK/T细胞淋巴瘤细胞系中四种类型的趋化因子产生有关。与健康个体的患者相比，观察到TARC，MDC，IL-8和MCP-1的表达显着增加，在患者标本中也证实了四种类型的趋化因子。此外，在鼻腔NK/T细胞淋巴瘤细胞系中也观察到CCR4的表达（TARC和MDC受体的表达），人们认为有必要研究TARC和MDC通过自动促迁移迁移并提高侵入性的能力。