既存薬による転写を標的とした萎縮性側索硬化症の新規治療法開発

使用现有药物靶向转录开发治疗萎缩性侧索硬化症的新疗法

• 批准号: 24790880
• 负责人: 村上 学
• 金额: $ 2.75万
• 依托单位: Kyoto University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
• 财政年份: 2012
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2012-04-01 至 2013-03-31
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-24790880/
• 关键词: 筋萎縮性側索硬化症

本研究で我々の確立したスクリーニング・システムは、SOD1の転写を抑制するFDAで承認されている既存薬Xを同定した。既存薬XのSOD1転写抑制効果は、in vitroで、定量的リアル・タイムRT-PCR及びウェスタン・ブロッティングでmRNA、蛋白レベルともに効果を判定した。さらに、他のrhoキナーゼ(ROCK)阻害薬であるY-27632でも同様にSOD1の発現を抑制することを見出した。ROCKはROCK1とROCK2の2種類あり、RNA干渉によりその発現をひとつずつ抑制しても、SOD1の発現を抑制する作用はなかった。しかし、ROCK1とROCK2を同時にノックダウンすることにより初めてSOD1転写抑制作用を有することを見出した。以上の結果から、ROCK1及び2の活性を抑制することがSOD1の転写を制御することにつながり、かつ既存薬XがROCKの抑制効果を介してSOD1の転写を抑制していることを示唆するものである。既存薬Xは国内で既に臨床で使用されており、その安全性は広く受け入れられている。我々の研究は既存薬Xの新たな薬理学的性質を提示するとともに、ALS治療薬として新たに再配置できる可能性を示すものである。NFκBレポーターアッセイを用いてさらに解析すると、既存薬XがROCK抑制効果を介してNFκBの活性を低下させていることが示された。NFκBは神経炎症に関わる主要な転写因子で、ALS患者の脊髄前角においてその発現が亢進することが報告されている。 さらにNFκBの転写調節領域が、SOD1の5’非翻訳領域にあるプロモータ領域に存在しており、NFκBが実際にSOD1の転写調節因子の一つであるという報告もある。既存薬XのSOD1発現調節作用メカニズムの少なくとも一部は、NFκBを介している可能性が示唆された。

我们在这项研究中既定的筛查系统都确定了FDA批准的现有药物X，可抑制SOD1转录。通过定量的实时RT-PCR和Western印迹在MRNA和蛋白质水平上，在体外确定了现有药物X的SOD1转录抑制作用的影响。此外，发现另一种Rho激酶（岩石）抑制剂Y-27632类似地抑制了SOD1的表达。岩石，岩石1和岩石有两种类型，即使它被RNA干扰抑制，它也没有抑制SOD1表达的作用。但是，发现SOD1转录抑制仅通过同时击倒Rock1和Rock2才能实现。以上结果表明，抑制岩石1和2的活性导致控制SOD1的转录，并且现有的药物X通过岩石的抑制作用抑制SOD1转录。现有的药物X已经在日本临床使用，其安全性已被广泛接受。我们的研究介绍了现有药物X的新药理特性，并证明了作为ALS治疗的新搬迁的可能性。使用NFκB报告基因测定的进一步分析表明，现有的药物X通过其岩石抑制作用降低了NFκB的活性。 NFκB是参与神经炎症的主要转录因子，据报道，ALS患者的前脊柱角增加了其表达。此外，有报道称，NFκB的转录调节区域存在于位于SOD1的5'未翻译区域中的启动子区域中，而NFκB确实是SOD1的转录调节剂之一。已经提出，至少可以通过NFκB介导了现有药物X的SOD1表达调节作用的某些机制。

项目成果

既存薬によるSOD1転写を標的とした筋萎縮性側索硬化症新規治療法の開発

使用现有药物靶向 SOD1 转录开发治疗肌萎缩侧索硬化症的新疗法

• 发表时间: 2012
• 作者: Saito T;Hasegawa Y;Ishigaki Y;Yamada T;Gao J;Imai J;Uno K;Kaneko K;Ogihara T;Shimosawa T;Asano T;Fujita T;Oka Y;Katagiri H.;玉川祐司;玉川祐司;玉川祐司;Tamagawa Y;Tamagawa Y;玉川祐司;Masaya Sakamoto;Hirofumi Suzuki;Hirofumi Suzuki;Hirofumi Suzuki;Yosuke Kayama;江口航生;Katsuno T;Yasuda K;Yasuda K;Abe H;村上 学
• 通讯作者: 村上 学