内在化αシヌクレインにおけるESCRTを中心とした小胞輸送に関する研究

以ESCRT为中心的内化α-突触核蛋白囊泡转运研究

• 批准号: 25461264
• 负责人: 菅野 直人
• 金额: $ 3.24万
• 依托单位: Tohoku University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
• 财政年份: 2013
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2013-04-01 至 2014-03-31
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-25461264/
• 关键词: alpha-synuclein; ESCRT; Nedd4; 小胞輸送

神経変性疾患における異常凝集タンパクの細胞間伝播が注目されているが、その機構に関しては未だ不明な点が多い。近年E3ユビキチンライゲースNedd4がαシヌクレイン(aS)に標的タンパクの細胞内移動に関わるK63ユビキチンを付加する事が報告された。Nedd4は膜結合ドメインを持つ事から、内在化し膜近傍に存在するaSの輸送制御への関連に着目し研究を行った。まず、aSをリコンビナントタンパクとして大腸菌で合成し、サイズクロマトグラフィーで<100kDaに精製。細胞内局在の顕微鏡下での可視化のために一部は蛍光色素標識した。実験細胞SH-SY5Yの培地にaSを5μMで添加すると、時間・濃度依存性に後期エンドソームへの蓄積がみられた。in vivoでNedd4はaSをUbcH5, H6存在下でK63ポリユビキチン化した。Nedd4過剰発現条件下ではaSのエンドソーム蓄積が促進し、一方、ユビキチン・リガーゼ欠損変異型(C867A)および基質結合部位欠損変異型(ΔWW)はエンドソーム蓄積に影響を与えなかった。siRNAによるCHMP2Bのノックダウンでエンドソームに蓄積するaSが抑制された事から、aSはESCRTによってエンドソームへターゲッティングされているものと考えられた。基質のプロリンを多く含む領域にNedd4が結合するため、C末端に存在すると予想される部位(PR)を欠損させたaSをリコンビナントタンパクとして精製。これらの変異型aSはNedd4によるユビキチン化が抑制され、またエンドソームへの内在化も抑制された。さらに、PR配列に含まれる2つのプロリンをアラニンに変換した変異体を作製し、うちP120A変異型はユビキチン化・エンドソーム輸送ともに抑制され、P120がaS内在化において重要な役割を持つものと考えられた。

The abnormal aggregation and cellular transmission of neurodegenerative diseases are noted in the study. In recent years, E3, Nedd4 and K63 have been reported aS the target of intracellular migration. Nedd4 is a research project on the relationship between membrane binding and transport control in the vicinity of membrane. The protein was synthesized by E. coli and refined to <100kDa. The intracellular structure is visualized under a microscope, and part of it is labeled with a fluorescent pigment. 5μM of SH-SY5Y was added to the culture medium, and the accumulation of SH-SY5Y was time-dependent. In vivo <$Nedd4 UbcH5, H6 K63 Under the condition of Nedd4 overgrowth, the accumulation of anti-virus is promoted, one side, one side siRNA is used to inhibit the development of CHMP2B and ESCRT. The matrix contains multiple regions of Nedd4 binding, C-terminal presence, and desired sites (PR). This is the first time that we've had a problem with this. In addition, the PR configuration includes the following: 2. The selection of the first line is changed to the second line. The selection of the second line is changed to the third line. The selection of the third line is changed to the fourth line. The selection of the third line is changed to the fourth line. The selection of the fourth line is changed to the fourth line. The fourth line is changed to the fourth line. The fifth line

项目成果

E3ユビキチンライゲースNedd4は細胞外αシヌクレインのエンドソームへのターゲッティングを制御する

E3 泛素连接酶 Nedd4 控制细胞外 α-突触核蛋白靶向内体

• 发表时间: 2013
• 作者: 菅野直人;長谷川隆文;今野昌俊;三浦永美子;大嶋龍司;菊池昭夫;青木正志;武田篤
• 通讯作者: 武田篤

Corticospinal tract signal changes in a patient with spinal and bulbar muscular atrophy

脊髓和延髓肌萎缩症患者的皮质脊髓束信号变化

• DOI: 10.1111/j.2049-4173.2013.00025.x
• 发表时间: 2013
• 期刊: Neurology and Clinical Neuroscience
• 影响因子: 0.4
• 作者: Naoto Sugeno;Ayumu Sunaguchi;Ayumi Nishiyama;Masaaki Kato and Masashi Aoki
• 通讯作者: Masaaki Kato and Masashi Aoki

Hereditary neuropathy with liability to pressure palsy emerging after hypothyroidism

甲状腺功能减退后出现压力性麻痹的遗传性神经病

• DOI: 10.1111/ncn3.41
• 发表时间: 2013
• 期刊: Neurology and Clinical Neuroscience
• 影响因子: 0.4
• 作者: Kimihiko Kaneko;Naoto Sugeno;Maki Tateyama;Tatsuro Misu;Naoki Suzuki and Masashi Aoki
• 通讯作者: Naoki Suzuki and Masashi Aoki

K63-linked ubiquitination by E3 ubiquitin ligase Nedd4-1 facilitates endosomal sequestration of internalized alpha-synuclein

E3 泛素连接酶 Nedd4-1 的 K63 连接泛素化促进内化 α-突触核蛋白的内体隔离

• 发表时间: 2014
• 期刊: Journal of Biological Chemistry
• 影响因子: 4.8
• 作者: Sugeno N;Hasegawa T;Tanaka N;Fukuda M;Wakabayashi K;Oshima R;Konno M;Miura E;Kikuchi A;Baba T;Anan T;Nakao M;Geisler S;Aoki M;Takeda A.
• 通讯作者: Takeda A.

Isolated posterior column lesion in a case with mixed connective tissue disease

混合性结缔组织病孤立性后柱病变一例

• DOI: 10.1111/ncn3.88
• 发表时间: 2014
• 期刊: Neurology and Clinical Neuroscience
• 影响因子: 0.4
• 作者: Tomomi Shijo;Naoto Sugeno;Hiroshi Kuroda;Takafumi Hasegawa;Atsushi Takeda and Masashi Aoki
• 通讯作者: Atsushi Takeda and Masashi Aoki