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骨関節組織におけるシスチン/グルタミン酸アンチポーターの機能解析

骨和关节组织中胱氨酸/谷氨酸逆向转运蛋白的功能分析

基本信息

批准号：
08J05726
负责人：
宇野恭介
金额：
$ 1.15万
依托单位：
Kanazawa University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for JSPS Fellows
财政年份：
2008
资助国家：
日本
起止时间：
2008 至 2010
项目状态：
已结题

项目摘要

前年度までの研究により、骨芽細胞においては高濃度の細胞外グルタミン酸(Glu)により、Xc^-輸送系の逆行性輪送活性が亢進して、増殖性が抑制されるという結果を得た。また、MC3T3-E1細胞にxCT遺伝子を強制発現することにより細胞の増殖能は強制発現細胞においてコントロール群に比べて有意な上昇が確認された。さらに強制発現細胞では、骨芽細胞分化能は有意な抑制が確認された。本年度はxCT強制発現細胞を用いさらなる解析を行った。xCT強制発現細胞およびコントロールとして空ベクターを導入した細胞を用い、[^<14>C]標識されたシスチンを用いて、シスチンの取り込み活性を測定した。その結果、強制発現細胞においてはシスチンの取り込み能の著明な上昇が確認された。また、強制発現細胞においては骨芽細胞分化過程の抑制が確認されたので、マスターレギュレーターであるRunx2のdeletion constractを作成し、その転写能について検討を行ったところ、転写開始点上流976bp付近で有意な抑制が確認された。またこれは一過性の発現ベクターを用いた場合でも同様の結果が得られた。さらに、MC3T3-E1へ一過性にxCT発現ベクターを導入した際にも、MTT還元能の上昇ならびに、Runx2タンパク質の発現減少が確認されたのに対し、xCTのsiRNAを導入した際には、MTT還元能の減少ならびに、Runx2タンパク質の発現上昇が確認された。また、OVXマウスの大腿骨および脛骨より、totalRNAおよびタンパク質を回収したところ、OVXマウスにおいては、xCTのタンパク質、mRNAいずれにおいても著明な発現上昇が確認された。これらの結果より、xCTの機能を抑制することにより、骨粗鬆症治療につながる可能性が示唆される。

Before the annual までの research により bud cells, bone においては high-concentration の extracellular グルタミン acid (Glu) により, Xc ^ - delivery is の retrograde wheel send active が hyperthyroidism して, raised colonization が inhibit されるといたをう results. また, MC3T3 E1 cells に xCT posthumous son 伝を forced 発 now することにより cells can は forced 発の raised colonization now においてコントローにル group than べて intentionally な rise が confirm された. Youdaoplaceholder0 forced cell development でで and bone bud cell differentiation can で intentionally な inhibit が confirm された. This year, <s:1> xCT mandatory occurrence cells を use をさらなる to analyze を rows った. XCT 発 now compulsory cell およびコントロールとして empty ベクターを import した cells をい, [^ < > 14 C] identity されたシスチンを with いて, シスチンの take り込をみ activity determination した. The result of そそ, the forced occurrence of cells におそてシスチシスチ <s:1> <s:1> can show a clear な increase が, confirming された. また, forced 発 now cells においてはの inhibit bone bud differentiation process が confirm されたので, マスターレギュレーターである Runx2 の deletion Constract をし, consummate その planning can write について検 line for をったところ, planning to write starting point for high pay nearly 976 bp で intentionally な inhibit が confirm された. またこれは transient の発 now ベクターを with いた occasions でも with others in the result of のがられた. さらに, MC3T3 E1 へ transient に xCT 発 now ベクターを import した interstate にも, determined by MTT and yuan rise のならびに, Runx2 タンパク qualitative の発 now reduce が confirm されたのにし seaborne, xCT の siRNA を import した interstate には, determined by MTT and yuan can reduce なのらびに, Runx2 タンパク qualitative の発 now Rise が confirm された. また, OVX マウスの thighbone および tibial より, totalRNA およびタンパクを returned to 収したところ, OVX マウスにおいては, xCT のタンパク qualitative, mRNA いずれにおいても zhao Ming な発 now rising が confirm された. これらの results より, xCT の function を inhibit することにより, thick loose bone disease treatment につなががる possibility in stopping される.