PP2C調節物質を用いた真核細胞におけるシグナル伝達経路の解析

使用 PP2C 调节剂分析真核细胞中的信号转导途径

• 批准号: 08J09943
• 负责人: 油井 信弘
• 金额: $ 0.77万
• 依托单位: Iwate University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for JSPS Fellows
• 财政年份: 2008
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2008 至 2009
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-08J09943/
• 关键词: PP2C; 活性化剤; 阻害剤; Pisiferdiol; Sanuinarine; アポトーシス; がん細胞; カルシウムシグナル伝達; Sanguinarine; 破骨細胞

本研究では、PP2C機能研究のためのPP2C阻害剤と活性化剤を提供することと、その分子メカニズムを明らかにし、真核細胞におけるPP2Cの機能を解明することを目的とした。昨年度ではPP2Cを活性化するPisiferdiol(1)と阻害するSanguinarine(2)を見出し、そのin vitroにおける各種ホスファターゼに対する作用とHL60細胞に対するアポトーシス誘導活性を調べたが、今年度では、それらを論文としてまとめるとともに、1のカルシウムシグナル伝達に関わる遺伝子変異酵母(zds1 Δerg3Δpdr1/3Δ)に対する生育円活性について調べた。1は、0.3M CaCl_2を含むYPD培地での遺伝子変異酵母株に対してCa^<2+>依存的、濃度依存的に生育円活性を示した(0,5μg/disc,11.0mm)。また、FACS解析により、1のCa^<2+>によるG_2期遅延の抑圧が観察された。さらに、cnb1Δ株とmpk1Δ株に対する合成致死作用でmpk1Δに特異的に作用し、WT株に対するLi感受性の増大を示すことから、カルシニューリン経路に作用することが示唆されたが、直接の酵素阻害は300μMでも認められなかった。そこで、遺伝子変異酵母株におけるCa^<2+>シグナル伝達に関わるタンパク質のリン酸化状態と発現を調べたところ、1は0.1M CaCl_2によって亢進されたリン酸化Cdc28を脱リン酸化すると同時に、Cdc28pのチロシンキナーゼSwelpとカルシニューリンCnblpの減少を引き起こした。これまでに、酵母のPP2CホモログPtc1の抑制がカルシニューリンの活性化に関わると推定されており、1は遺伝子変異酵母株においてPP2Cを活性化させることで、カルシニューリンを抑制することが示唆される。

The purpose of this study is to investigate the function of PP2C and to provide a molecular mechanism for understanding the function of PP2C in eukaryotic organisms. In the past year, Pisiferdiol(1) and Sanguinarine(2) were found to be active in vitro. 1. The activity of the yeast (zds1 Δerg3Δpdr1/3Δ) is regulated by the enzyme. 1. CaCl_2 concentration dependent and Ca^<2+> dependent growth activity (0,5μg/disc, 11.0mm) was observed in different yeast strains cultured with YPD. FACS analysis was performed to detect the G_2 phase delay and pressure suppression of Ca^<2+> in 1. The synthetic lethal effect of cnb1Δ strain on mpk 1Δ strain is specific to mpk1Δ strain. The sensitivity of WT strain to Li is increased. The direct enzyme inhibition is 300μM. In addition to the above, the yeast strain Cdc28 was also isolated from the yeast strain Cdc28. In addition, Cdc28 was isolated from the yeast strain Cdc28. This is a putative mechanism for the activation of PP2C in yeast and Ptc1. The mechanism for the activation of PP2C in yeast and Ptc1 in yeast is also known.

项目成果

PP2C活性化作用を有する化合物の構造と機能性

具有PP2C活化作用的化合物的结构和功能

• 发表时间: 2008
• 作者: N. Arimitsu;A. Nakajima;T. Watanabe;Y. Kameshima;K. Okada;安永昌司;安永昌司;Masashi Yasunaga;紺野友彦;油井信弘
• 通讯作者: 油井信弘