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ゲノム不安定化の起源―チェックポイントと修復のクロストーク―

基因组不稳定的起源 - 检查点和修复之间的串扰 -

基本信息

批准号：
08J40037
负责人：
中川浩子
金额：
$ 1.73万
依托单位：
Kyoto University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for JSPS Fellows
财政年份：
2008
资助国家：
日本
起止时间：
2008 至 2011
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-08J40037/
关键词：
DNAアルキル化損傷放射線高感受性 NBS1 ユビキチン化チェックポイント DNA二本鎖切断修復核内フォーカス MMS DNA二本鎖切断(DSB)DNA損傷修復細胞周期チェックボイント DNAアルキル化タンパク質修飾細胞周期チェックポイント

项目摘要

放射線高感受性ナイミーヘン症候群の原因遺伝子NBSIは放射線によるDNA二本鎖切断修復と細胞応答に機能していることは明らかとされていたが、(1)哺乳細胞のNBS1を完全に欠失すると生存できないことや(2)NBS患者細胞にもNBS1のタンパク質断片を発現し、NBS1分子機能を残していると考えられること(3)NBS1がUVによるDNA損傷応答に機能することから未知機能を有していると考えられる。本研究においてはDNAにアルキル化損傷や塩基損傷に対するNBS1の細胞制御を観察した。1.NBS1はアルキル化損傷修復と細胞周期チェックポイントに重要な役割を担う。NBS1欠失細胞はMMSとMNNGと過酸化水素に対して感受性を示す。またNBS1ノックダウン細胞にMMS処理後、チェックポイントキナーゼCHK2のリン酸化の結果からチェックポイント活性が低下している。さらにNBS1は放射線照射だけでなく、MMS処理によっても核内でフォーカスを形成した。2.NBS1はDNAアルキル化損傷時のDNA複製クランプローダー因子RFC2のユビキチン化を制御する。NBS患者細胞のクロマチン画分にはMMS処理後、RFC2のユビキチン化によるmobility siftが見られなかった。NBS1はDNA二重鎖切断時のH2Bと紫外線損傷時にPCNAのユビキチン化に関わっている事が報告されているが、それらのDNA損傷時にRFC2のユビキチン化されるか調べた結果、MMS処理時のNBS1相補細胞のクロマチン画分においてのみ見られることがわかった。さらにNBS1はMMS処理によってRFC2と核内フォーカスにおいて共局在することが解った。3.NBS1はRAD18ユビキチンライゲースによるRFC2のユビキチン化に必要である。DNAアルキル化損傷時RFC2のユビキチン化はRAD18によって行われる。NBS患者細胞とNBS1相補細胞でRad18とRFC2の共沈を確認した結果、NBS1相補細胞においてのみRFC2と共沈するRad18とNBS1のバンドが見られた。またRad18欠失細胞はMMSに対して感受性を示す。NBS1の部位欠失変異体を用いてMMSへの感受性を調べるとRad18結合部位欠失したNBS1変異株ではMMSへの高い感受性を示す。本研究はNBS1がDNAアルキル化損傷修復においても重要な機能をもつことを明らかとした。

NBSI is the causative gene of radiation hypersensitivity syndrome. It is responsible for the function of DNA duplex repair and cellular response.(1) Complete loss of NBS1 in mammalian cells.(2) Fragmentation of NBS1 in NBS patients.(3)NBS1 has a DNA damage response function due to UV. In this study, we investigated the cellular mechanisms of DNA damage and basal damage in NBS1. 1. NBS1 plays an important role in cell cycle repair. NBS1 is deficient in MMS and MNNG, and its sensitivity to acidification is indicated. After MMS treatment of NBS1 cells, the activity of NBS 1 cells decreased as a result of acidification of NBS 1 cells. NBS1 is irradiated with radiation and MMS is processed to form nuclear particles. 2. NBS1 controls DNA replication during DNA fragmentation by RFC2. NBS patient cells are divided into two groups: RFC2 and MMS. NBS1 DNA double lock when H2B and UV damage PCNA conversion related to the event reported, all DNA damage when RFC2 conversion results, MMS treatment of NBS1 phase complement cell separation. NBS1 and RFC2 are the core management systems. 3. NBS1 is required to submit a request to RAD18. When DNA is damaged, RFC2 is converted to RAD18. The co-precipitation of Rad18 and RFC2 in NBS patient cells and NBS 1 complement cells was confirmed. The co-precipitation of Rad18 and RFC2 in NBS1 complement cells was confirmed. Rad18 is not sensitive to MMS. NBS1 site deficiency indicates MMS sensitivity modulation, Rad18 binding site deficiency indicates MMS sensitivity modulation. In this study, NBS1 was identified as an important component of DNA damage repair.