正常p53遺伝子導入による骨肉腫細胞の放射線高感受性化の分子機構

正常p53基因转移诱导骨肉瘤细胞放射敏感性的分子机制

• 批准号: 06282232
• 负责人: 宮越 順二
• 金额: $ 1.15万
• 依托单位: Kyoto University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
• 财政年份: 1994
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1994 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-06282232/
• 关键词: p53導入; p53発現; 放射線感受性; 放射線増感; 骨肉腫細胞SAOS-2

ヒト由来骨肉腫細胞の(SAOS-2)のp53cDNAを組み込んだ発現プラスミド(pMSVneop53)をトランスフェクションし、G418にて選択し、比較的増殖の遅い40個のクローンを選んだ。これらのクローンからRNAおよびタンパクを抽出し、p53遺伝子の発現について、ノーザンおよびウエスタンブロットを用いて検索し、その結果、正常p53遺伝子が導入されたクローン(SAOS-MC11)およびp53のmRNAレベルでの発現はみられるがタンパク産生を行っていないクローン(SAOS-MC10)が得られた。p53遺伝子導入株(SAOS-MC11)と親株(SAOS-2)およびベクター導入株(SAOS-MSV)の放射線感受性を比較した場合、正常p53遺伝子導入株は親株やベクター導入株に比べ著しく放射線に感受性となった。また、SAOS-MC10細胞については有意な放射線感受性の変化は認められなかった。指数的増殖期における細胞周期分布を調べたところ、細胞株間における有意な差は見られなかった。次に、5Gy照射後20時間におけるDNAヒストグラムの結果、G2ブロックは共に見られたが、SAOS-MC11細胞も含めて放射線照射後の明確なG1ブロックが欠けていた。放射線照射後、SAOS-MC11細胞におけるp53遺伝子発現について、mRNAおよびタンパクレベルで検討した。その結果、mRNAおよびタンパク量共に線量依存的に増大した。本研究によって、p53遺伝子を欠失しているがん細胞に正常なp53遺伝子を導入することにより放射線感受性が高められることが示された。このことはp53タンパクが細胞の放射線感受性を支配している内因性因子の1つであることを示唆している。

The p53cDNA sequence of SAOS-2 cells was selected from 40 cDNA fragments of pMSVneop53, G418 and G418. The expression of p53 gene was detected by PCR, and the results showed that normal p53 gene was introduced into SAOS-MC11 (SAOS-MC11) and p53 gene was detected by PCR (SAOS-MC10). The radiation sensitivity of p53 gene introduced strain (SAOS-MC11) and parent strain (SAOS-2) was compared. SAOS-MC10 cells are sensitive to radiation. The cell cycle distribution of the index growth period is adjusted, and the intentional difference between the cell lines is observed. Next, 20 hours after 5 Gy irradiation, DNA sequencing results, G2 DNA sequencing results, SAOS-MC11 cells containing DNA sequencing results after 5 Gy irradiation, SAOS-MC11 cells containing DNA sequencing results, SAOS- After radiation exposure, SAOS-MC11 cells were detected by p53 gene expression and mRNA expression. As a result, mRNA and protein levels increased in a line-dependent manner. In this study, the p53 gene was absent from the cells and the p53 gene was introduced into the cells. The p53 gene is responsible for controlling the radiosensitivity of cells.