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がん関連糖鎖抗原に対する単鎖抗体の作製とその診断への応用

抗癌症相关糖抗原单链抗体的制备及其在诊断中的应用

基本信息

批准号：
08J40063
负责人：
高崎綾乃
金额：
$ 1.66万
依托单位：
Tokai University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for JSPS Fellows
财政年份：
2008
资助国家：
日本
起止时间：
2008 至 2010
项目状态：
已结题

项目摘要

〈内容〉本研究では、ファージディスプレイ法により取得したがん関連糖鎖構造を標的とした単鎖抗体の調製とその診断や治療への応用を目的とした。標的とした糖鎖構造は、T抗原糖鎖構造および、マンノトリオース構造である。申請者は、大腸菌発現系で不溶性となった単鎖抗体を封入体として大量に得て、これを可溶化し精製後、ステップワイズ透析法にてリフォールディングを行うことで可溶性単鎖抗体を得た。さらにSPR法などにより単鎖抗体の結合親和性を調べた。また、これら単鎖抗体の、乳がん細胞のFoci形成能への阻害効果を調べた。さらに単鎖抗体の糖鎖付加による安定化を目的として、ショウジョウバエ細胞を用いた単鎖抗体発現系の構築を行った。一方、がん関連糖鎖抗原であるTn抗原が2糖あるいは3糖並んだ構造を認識するマウスモノクローナルMLS128抗体について熱力学的解析を行い、糖鎖と抗体との相互作用メカニズムについて詳細な情報を得た。〈意義〉糖鎖は自己抗原であるため、それらに対する抗体は生体内では得られにくく、また、動物細胞ではその発現株の樹立が困難であることが判明している。本研究では大腸菌発現系を用いて、リフォールディングにより可溶性単鎖抗体を得ることとし、大量調製を目指した。一方、単鎖抗体の溶液中での可溶化および安定化を高めることを目的としてショウジョウバエ細胞発現系を選択しその調製を試みた。また、糖鎖に対する抗体を得るにあたり、抗体と糖鎖の相互作用メカニズムを知るのは非常に重要であると考えられたことから、MLS128抗体とTn抗原との相互作用についてSPR法、ITC法などにより熱力学的解析を行った。〈重要性〉標的となる糖鎖構造は両者ともに種々のがん細胞で高発現することが明らかにされており、がんの分子標的療法への応用が切望される。

The aim of this study is to obtain the target of the linked glycan antibody and its therapeutic application. The target sugar lock structure is similar to the T antigen sugar lock structure and the The applicant obtained the insoluble antibody-specific antibody in large quantities by solubilization and purification. The SPR method is used to modulate the binding affinity of single antibody. In addition, the antibody and the Foci of breast cells can be formed to inhibit the effects of apoptosis. The aim of this study was to construct a novel antibody development system for the treatment of diabetes mellitus. A party, a related carbohydrate lock antigen, a Tn antigen, a 2 carbohydrate, a 3 carbohydrate, a structure, a thermodynamic analysis, a carbohydrate lock and an antibody interaction, and detailed information were obtained. It is difficult to identify the presence of glycan antigen in vivo and in animal cells. In this study, the development of E. coli was studied by means of a series of experiments. The solubilization and stabilization of the antibody in solution were studied. It is very important to know the interaction between antibody and carbohydrate, MLS128 antibody and Tn antigen, SPR method and thermodynamic analysis. The structure of sugar locks is highly expressed in cells and cells, and the therapeutic use of molecular targets is desired.