Development of caspase-3 indicator based-on bioluminescence-fluorescence double resonant energy transfer

基于生物发光-荧光双共振能量转移的caspase-3指示剂的研制

• 批准号: 20770115
• 负责人: SAITO Kenta
• 金额: $ 2.91万
• 依托单位: Hokkaido University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
• 财政年份: 2008
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2008 至 2010
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-20770115/
• 关键词: バイオイメージング; 細胞内情報伝達; 生物発光共鳴エネルギー移動; 機能イメージング; カルシウム指示薬; BRET; イメージング; Rluc; Venus; 発光タンパク; 蛍光タンパク質; 自家蛍光

In this study, first, bioluminescence resonance energy transfer (BRET) based Ca^<2+> indicator, BRAC was developed and tested to evaluate its physiochemical properties. Second, BRAC was used to visualize Ca^<2+> dynamics in living cells (HeLa cells) and living plant (Arabidopsis thaliana) leaf. Finally, to make the indicator based on bioluminescent-fluorescent double resonant energy transfer, appropriate FRET acceptor for FRET donor Venus were investigated in possible orange to red fluorescent protein candidates. However FRET efficiency between Venus and these orange to red fluorescent proteins were poor, so additional studies should be needed.

本研究首先开发了基于生物发光共振能量转移(BRET)的钙离子指示剂BRAC，并对其进行了测试，以评价其理化性质。其次，利用BRAC对活细胞(HeLa细胞)和活植物(拟南芥)叶片中的Ca~(2+)&gt；动态进行了可视化。最后，为了制作基于生物发光-荧光双共振能量转移的指示剂，在可能的橙色到红色荧光蛋白候选中研究了适合FRET供体Venus的FRET受体。然而，金星和这些橙色到红色荧光蛋白之间的FRET效率很低，因此需要进行更多的研究。

项目成果

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Single live cell and plant Ca^<2+> imaging with BRET-based probes

使用基于 BRET 的探针进行单活细胞和植物 Ca^2 成像

• 发表时间: 2008
• 作者: Mitsuki;M.;Nara;K.;Yamaji;T.;Enomoto;A.;Kanno;M.;Yamaguchi;Y.;Yamada;A.;Waguri;S.;Hashimoto;Y.;齊藤健太
• 通讯作者: 齊藤健太

Auto-luminescent genetically-encoded ratiometric indicator for real-time Ca2+ imaging at the single cell level.

• DOI: 10.1371/journal.pone.0009935
• 发表时间: 2010-04-01
• 期刊: PloS one
• 影响因子: 3.7
• 作者: Saito K;Hatsugai N;Horikawa K;Kobayashi K;Matsu-Ura T;Mikoshiba K;Nagai T
• 通讯作者: Nagai T