口腔癌の分子標的化よる新規治療法・診断法の開発

通过口腔癌的分子靶向开发新的治疗和诊断方法

• 批准号: 20592364
• 负责人: 中村 公則
• 金额: $ 1.91万
• 依托单位: Sapporo Medical University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
• 财政年份: 2008
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2008 至 2010
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-20592364/
• 关键词: 新規腫瘍マーカー

口腔癌の標的化を月指した診断・治療法の開発を目的として、新たな口腔癌細胞に特異的な表面分子の同定するために、ファイバー改変型アデノウイルスAdv-FZ33と癌細胞に対する抗体ライブラリーを用いて、癌細胞に特異的な細胞表面分子をスクリーニング・同定と同時に高性能なモノクローナル抗体の樹立を実施した。抗体ライブラリーの作製:口腔癌細胞(ヒトHSC-2、HSC-3、OSC-70などの混合)でBa1b/cマウスを腹腔へ免役し、P3U1ミエローマ細胞と免疫マウスの脾細胞とをPEG法により細胞融合させ、腫瘍に対する抗体を産生するハイブリドーマ・ライブラリーを作製した。細胞融合後、抗体を含有する培養上清を回収し、以下のスクリーニングを行った。スクリーニングとハイブリドーマ・クローンの樹立:Adv-FZ33を用いて、抗体と腫瘍細胞と架橋することで、遺伝子導入効率が高まるような抗体のスクリーニングを行った。方法:96wellに播種した標的細胞(口腔癌細胞株)に抗体(ハイブリドーマの上清)を反応させる、その後レポーター遺伝子LacZを発現するAx3CAZ3-FZ33を感染させる。24時間後に、Chemiluminescent β-Ga1レポーター遺伝子発現アッセイを行い、LacZ遺伝子産物の発現量を評価する。コントロールに比べて100倍程度、遺伝子導入発現効率が高まっているクローンを選別する。アッセイは3回行い、擬陽性のクローンは除いた。単一のハイブリドーマから単一の抗体産生クローンを樹立するため、96wellを用いたハイブリドーマ細胞の限界希釈クローニングを行った。結果、Z33-Advを介した遺伝子導入が高効率なモノクローナル抗体を12種類樹立する事が出来た。今後、得られた抗体の抗原同定を行って行く。

The treatment of oral cancer is based on the treatment of oral carcinoma. the purpose of this method is to detect the surface molecules of oral cancer cells, to detect the surface molecules of oral cancer cells, to detect the surface molecules of oral cancer cells, to detect the surface molecules of oral cancer cells, to detect the surface molecules of oral cancer cells, to detect the surface molecules of oral cancer cells, to detect the surface molecules of oral cancer cells, to detect the surface molecules of oral cancer cells, to detect the surface molecules of oral cancer cells, to detect the surface molecules of oral cancer cells, to detect the surface molecules of oral cancer cells, to detect the surface molecules of oral cancer cells, to detect the surface molecules of oral cancer cells, to detect the surface molecules of oral cancer cells, to detect the surface molecules of oral cancer cells, to detect the surface molecules of oral cancer cells, to detect the surface molecules of oral cancer cells, to detect the antibodies of oral cancer cells, and to detect the surface molecules of oral cancer cells. The cell surface molecules of cancer cells were detected by Elisa. At the same time, high-performance cell surface molecules were tested by high-performance antibody assay. Antibodies: oral cancer cells (mixed with HSC2, HSC-3 and OSC-70 antibodies), Ba1b/c cells, abdominal cavity immune cells, P3U1 cells immune cells, spleen cells, PEG method, cell fusion assay, antibody antibodies, immune cells, immune cells, immune cells, After cell fusion, the antibody contains the supernatant, the supernatant, and the following cells. Adv-FZ33, antibody, cell, antibody, and so on. Methods: the antibody (supernatant) of oral cancer cell line (oral cancer cell line) was inoculated by 96well, and the infection rate of Ax3CAZ3-FZ33 infection was detected by LacZ. After 24 hours, the Chemiluminescent β-Ga1 payload monitoring sub-system will show that the consumer goods will be sold, and the LacZ consumer goods will be sold as much as possible. The number of users is 100 times higher than that of others, and the rate of sub-import is very high. Please do not go back 3 times, and you will not be able to do so. One day, one day, one antibody, one antibody. Results: the results showed that the positive rate of Z33-Adv was higher than that of the control group (P < 0.05). From now on, we will get the same antigen as the antibody.