口腔癌の分子標的化よる新規治療法・診断法の開発

通过口腔癌的分子靶向开发新的治疗和诊断方法

• 批准号: 20592364
• 负责人: 中村 公則
• 金额: $ 1.91万
• 依托单位: Sapporo Medical University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
• 财政年份: 2008
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2008 至 2010
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-20592364/
• 关键词: 新規腫瘍マーカー

口腔癌の標的化を月指した診断・治療法の開発を目的として、新たな口腔癌細胞に特異的な表面分子の同定するために、ファイバー改変型アデノウイルスAdv-FZ33と癌細胞に対する抗体ライブラリーを用いて、癌細胞に特異的な細胞表面分子をスクリーニング・同定と同時に高性能なモノクローナル抗体の樹立を実施した。抗体ライブラリーの作製:口腔癌細胞(ヒトHSC-2、HSC-3、OSC-70などの混合)でBa1b/cマウスを腹腔へ免役し、P3U1ミエローマ細胞と免疫マウスの脾細胞とをPEG法により細胞融合させ、腫瘍に対する抗体を産生するハイブリドーマ・ライブラリーを作製した。細胞融合後、抗体を含有する培養上清を回収し、以下のスクリーニングを行った。スクリーニングとハイブリドーマ・クローンの樹立:Adv-FZ33を用いて、抗体と腫瘍細胞と架橋することで、遺伝子導入効率が高まるような抗体のスクリーニングを行った。方法:96wellに播種した標的細胞(口腔癌細胞株)に抗体(ハイブリドーマの上清)を反応させる、その後レポーター遺伝子LacZを発現するAx3CAZ3-FZ33を感染させる。24時間後に、Chemiluminescent β-Ga1レポーター遺伝子発現アッセイを行い、LacZ遺伝子産物の発現量を評価する。コントロールに比べて100倍程度、遺伝子導入発現効率が高まっているクローンを選別する。アッセイは3回行い、擬陽性のクローンは除いた。単一のハイブリドーマから単一の抗体産生クローンを樹立するため、96wellを用いたハイブリドーマ細胞の限界希釈クローニングを行った。結果、Z33-Advを介した遺伝子導入が高効率なモノクローナル抗体を12種類樹立する事が出来た。今後、得られた抗体の抗原同定を行って行く。

为了开发针对口腔癌的诊断和治疗方法，为了鉴定针对新口腔癌细胞的表面分子，我们使用光纤改性的腺病毒adenovirus advz33和抗体库来筛选和鉴定针对癌细胞特有的细胞表面分子，并确定了高性能单纤维抗体。抗体库的制备：Ba1b/c小鼠用口腔癌细胞（人HSC-2，HSC-3，OSC-3，OSC-70等）和P3U1骨髓瘤细胞和PEG小鼠的脾细胞融合PEG产生杂交抗体的抗体，将BA1B/C小鼠免疫到腹膜腔中（人HSC-2，HSC-3，OSC-3，OSC-70等）和P3U1骨髓瘤细胞和P3U1骨髓瘤细胞和脾脏。细胞融合后，收集含有抗体的培​​养上清液，并进行以下筛选。杂交瘤克隆的筛选和建立：ADV-FZ33用于筛选抗体，以通过与肿瘤细胞的交联抗体来提高基因转导效率。方法：在96植物中播种的靶细胞（口腔癌细胞系）与抗体（杂交瘤上清液）反应，然后用AX3CAZ3-FZ33感染，该AX3CAZ3-FZ33表达了报告基因lacz。 24小时后，进行化学发光的β-GA1报告基因表达测定法以评估LACZ基因产物的表达水平。选择基因转移表达效率提高的克隆比对照组大约高约100倍。该测定进行了三次，并排除了假阳性克隆。为了从单个杂交瘤建立单一抗体产生的克隆，使用96孔对杂交瘤细胞的限制克隆进行了克隆。结果，我们能够建立12种类型的单克隆抗体，这些抗体在通过Z33-ADV的基因转移方面高效。将来，将确定获得抗体的抗原。