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化学工業的利用を目指した微細緑藻由来の新奇エポキシド生成酵素の探索

寻找源自微绿藻的新型环氧化物生成酶用于化学工业用途

基本信息

批准号：
20658049
负责人：
岡田茂
金额：
$ 2.24万
依托单位：
The University of Tokyo
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Challenging Exploratory Research
财政年份：
2008
资助国家：
日本
起止时间：
2008 至 2010
项目状态：
已结题

项目摘要

Botryococcus brauniiは大量の液状炭化水素を生産するため、再生産可能なエネルギー資源として有望視されている微細藻類である。本藻種のB品種は、ボツリオコッセン類と呼ばれるトリテルペンとメチルスクアレン類を生産するとともに、メチルスクアレンエポキシドおよびその誘導体を蓄積する。さらにB品種は長鎖脂肪鎖炭化水素類のエポキシドも生産している。これらの事実は、本種のB品種が幅広いタイプの炭化水素の二重結合に、エポキシ基を導入する能力を持っていることを意味している。そこで本研究はB.brauniiに存在する未知エポキシド合成酵素の諸性状を明らかにすることを目的とした。前年度は、本藻の粗抽出物あるいはミクロソーム画分を用い、トリチウムラ標識したファルネシル二リン酸を基質として反応を行ったが、その反応生成物は目的のスクアレンエポキシドでは無かった。そこで本年度はリコンビナントスクアレン合成酵素を大腸菌で発現させ、これを用いてトリチウム標識したスクアレンを調製し、酵素反応に用いた。しかしながらスクアレンは非常に低極性の物質であるため、酵素反応の条件検討が必要であった。そこでスクアレンへのS-アデノシルメチオニンからのメチル基転位酵素活性を指標にし、活性測定法の検討を行ったところ、0.02%のTween80等の界面活性剤の添加が有効であることが明らかになった。この系を用いてエポキシ基導入活性を調べたが、顕著な活性は認められなかった。今後はEST解析情報を基にエポキシ基導入に関与すると思われる酵素の候補を絞り、活性を調べていく必要がある。

Botryoccus braunii produces and reproduces a large amount of liquid carbonized water, which is expected to produce microalgae. The B species of this algae species accumulate the inducer of the production of different species. In addition, B varieties have long locks, fat locks, and carbonized water elements. The ability of B species to combine carbon and water elements in a wide range and to introduce carbon and water elements in a wide range is important. The purpose of this study is to investigate the presence of B.braunii and its related traits. In the past year, crude extracts of the algae have been identified by the use of a variety of methods. This year, the production of E. coli and the use of enzymes in the production of E. coli and the use of enzymes in the production of E. coli are discussed. It is necessary to study the conditions of enzyme reaction. The addition of surfactant such as 0.02% Tween80 and other surfactants to the enzyme activity index and activity assay method is also effective. This is the first time that we've had a chance to do this. In the future, EST analysis information is required for enzyme candidate selection and activity adjustment.