权益分类	功能权益	普通用户	{{item.name}}会员
{{category.name}}	{{benefitItem.name}}

微細類からの有用炭化水素合成酵素遺伝子の探索

从微生物中寻找有用的碳氢化合物合酶基因

基本信息

批准号：
12760137
负责人：
岡田茂
金额：
$ 1.47万
依托单位：
The University of Tokyo
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
财政年份：
2000
资助国家：
日本
起止时间：
2000 至 2001
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-12760137/
关键词：
微細藻類緑藻 Botryococcus braunii 炭化水素スクアレン生合成酵素遺伝子

项目摘要

群体性微細緑藻Botryococcus brauniiは光合成により固定した二酸化炭素を、大量の液状炭化水素に変換、蓄積するため、再生産可能なエネルギー資源としての利用が考えられている。本藻種には炭化水素として脂肪酸由来の直鎖状のalkadiene、alkatrieneを生産するA品種、トリテルペンであるbotryococcene類およびスクアレン誘導体を生産するB品種、テトラテルペンであるlyopadieneを生産するL品種の3品種があり、これらの中で炭化水素の質および含量の点からエネルギー資源として最も有望なのはB品種である。本藻種による有用炭化水素生産を行うためには、炭化水素合成酵素遺伝子に関する知見を得ることが必要である。そこでB品種であるBerkeley株からトリテルペン合成酵素遺伝子の探索を試みた。前年度までにBerkeley株から作成されたcDNAライブラリーのスクリーニングにより得られた遺伝子は、スクアレン合成酵素に存在する5つの活性ドメインの内、4つまでを保持していた。そこでこの遺伝子をpET11ベクターに導入し大腸菌内で発現させた。この大腸菌のホモジネートを用いてスクアレン合成酵素およびbotryococcene合成酵素活性を測定したが、目的のタンパク質が封入体画分に存在していたため、いずれの酵素活性も検出できなかった。そこでpET32ベクターを用いてチオレドキシンとの融合タンパクとして本遺伝子を発現させたところ可溶性タンパク質が得られたが、botryococcene合成酵素活性は示さなかった。これは原核生物内では活性の発現に必要なタンパク質の修飾が行われないためであると考えられた。そこで現在、本遺伝子の酵母での発現を試みている。

The colony microalgae Botryoccus braunii can be used for photosynthesis, fixation, transformation, accumulation and reproduction of carbon dioxide and a large amount of liquid carbon dioxide. The algae species A, B and L produce alkadiene and alkatriene, which are derived from fatty acids. The algae species A, B and L produce alkadiene and alkatriene. The algae species A, B and C produce alkadiene and alkatriene. The algae species A, B and C produce alkadiene and alkatriene. The algae species A, B and C produce alkadiene and alkatriene. This algae species is useful for the production of carbonized water. A new type of strain, Berkeley, was developed to explore the enzyme pathway. In the previous year, Berkeley strains were produced with cDNA fragments, and the presence of cDNA fragments and cDNA synthase enzymes was maintained. The gene was introduced into E. coli and found in E. coli at pET11. The activity of E. coli synthase and botryocene synthase was measured in the presence of E. coli in the medium and in the presence of E. coli in the medium In addition, the activity of botryocene synthase was also detected in pET32. This is a necessary modification for the development of prokaryote activity. The yeast of the original seed is produced in the middle of the experiment.