微細類からの有用炭化水素合成酵素遺伝子の探索

从微生物中寻找有用的碳氢化合物合酶基因

• 批准号: 12760137
• 负责人: 岡田 茂
• 金额: $ 1.47万
• 依托单位: The University of Tokyo
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
• 财政年份: 2000
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2000 至 2001
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-12760137/
• 关键词: 微細藻類; 緑藻; Botryococcus braunii; 炭化水素; スクアレン; 生合成酵素遺伝子

群体性微細緑藻Botryococcus brauniiは光合成により固定した二酸化炭素を、大量の液状炭化水素に変換、蓄積するため、再生産可能なエネルギー資源としての利用が考えられている。本藻種には炭化水素として脂肪酸由来の直鎖状のalkadiene、alkatrieneを生産するA品種、トリテルペンであるbotryococcene類およびスクアレン誘導体を生産するB品種、テトラテルペンであるlyopadieneを生産するL品種の3品種があり、これらの中で炭化水素の質および含量の点からエネルギー資源として最も有望なのはB品種である。本藻種による有用炭化水素生産を行うためには、炭化水素合成酵素遺伝子に関する知見を得ることが必要である。そこでB品種であるBerkeley株からトリテルペン合成酵素遺伝子の探索を試みた。前年度までにBerkeley株から作成されたcDNAライブラリーのスクリーニングにより得られた遺伝子は、スクアレン合成酵素に存在する5つの活性ドメインの内、4つまでを保持していた。そこでこの遺伝子をpET11ベクターに導入し大腸菌内で発現させた。この大腸菌のホモジネートを用いてスクアレン合成酵素およびbotryococcene合成酵素活性を測定したが、目的のタンパク質が封入体画分に存在していたため、いずれの酵素活性も検出できなかった。そこでpET32ベクターを用いてチオレドキシンとの融合タンパクとして本遺伝子を発現させたところ可溶性タンパク質が得られたが、botryococcene合成酵素活性は示さなかった。これは原核生物内では活性の発現に必要なタンパク質の修飾が行われないためであると考えられた。そこで現在、本遺伝子の酵母での発現を試みている。

Mass micro algae Botryococcus braunii は photosynthetic に よ り fixed し た acidification carbon を, a large number of の liquid coking water element に variations change, volume す る た め reproduction, may な エ ネ ル ギ ー resources と し て の using が exam え ら れ て い る. This effects に は coking water element と し て fatty acids origin の straight lock の alkadiene, alkatriene を production す る A variety, ト リ テ ル ペ ン で あ る botryococcene class お よ び ス ク ア レ ン inductor を production す る varieties, B テ ト ラ テ ル ペ ン で あ る lyopadiene を production す る L が の 3 breeds あ り, こ れ ら の の で coking water in qualitative お よ び content の point か ら エ ネ ル ギ ー resources と し て most も could な の は B varieties で あ る. This effects に よ る useful coking water element production line を う た め に は heritage, coking water element synthesis enzyme 伝 son に masato す る knowledge を must る こ と が necessary で あ る. Youdaoplaceholder0 を で で of variety B であるBerkeley strain らトリテ らトリテ ペ ペ <s:1> exploration of 伝 seed <e:1> of synthetic enzyme を test みた. Before the annual ま で に Berkeley strains か ら made さ れ た cDNA ラ イ ブ ラ リ ー の ス ク リ ー ニ ン グ に よ り must ら れ た heritage 伝 は, ス ク ア レ ン synthetic enzyme に exist す る 5 つ の active ド メ イ ン の inside, 4 つ ま で を keep し て い た. そ こ で こ の posthumous son 伝 を pET11 ベ ク タ ー に import し coliform in で 発 now さ せ た. こ の coliform の ホ モ ジ ネ ー ト を with い て ス ク ア レ ン synthetic enzyme お よ び を botryococcene synthesis enzyme activity determination し た が, purpose の タ ン パ ク qualitative が seal in body painting existence に し て い た た め, い ず れ の enzyme activity も 検 out で き な か っ た. そ こ で pET32 ベ ク タ ー を with い て チ オ レ ド キ シ ン と の fusion タ ン パ ク と し て this heritage 伝 son を 発 now さ せ た と こ ろ soluble タ ン パ ク qualitative が must ら れ た は が botryococcene synthesis and enzyme activity in さ な か っ た. こ れ は in prokaryotes で は active の 発 に now necessary な タ ン パ ク mass line の modified が わ れ な い た め で あ る と exam え ら れ た. Youdaoplaceholder0 で で now, 伝 seed <s:1> yeast で で shows を trials みて る る る.