受容体の活性化により惹起される細胞内Ca2+動態と情報伝達系の分子メカニズム解明

阐明受体激活诱导的细胞内Ca2+动力学和信息转导系统的分子机制

• 批准号: 21590272
• 负责人: 鈴木 史子
• 金额: $ 2.5万
• 依托单位: University of Fukui
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
• 财政年份: 2009
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2009 至 2011
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-21590272/
• 关键词: スナピン; アドレナリン受容体; TRPC6チャネル; ROCC

私たちは、受容体作動性Ca^<2+>流入機構の一つとして、受容体およびチャネルと相互作用するSnapin分子が、受容体の活性化を受けて二量体を形成することにより"受容体-Snapin-チャネル"複合体を形成し、受容体が活性化されたというシグナルをチャネルへ伝達するメカニズムを考えている。そして、Snapinが複数の受容体やチャネルと相互作用することにより、このCa^<2+>流入機構が汎用性を持つと考えている。本年度はこのような仮説に基づいて検討し、以下のような結果を得た。1.α_<1A>受容体の活性化を受けて、細胞内に存在しているTRPC6チャネルが細胞膜表面に移行することがCa^<2+>流入増大の直接的なメカニズムであることを、brefeldin A(タンパク輸送阻害剤)を用いて検討した。brefeldin Aで処置した細胞では、α_<1A>アドレナリン受容体の活性化により引き起こされるTRPC6チャネルを介するCa^<2+>流入が著しく抑制されたことから、α_<1A>受容体作動性Ca^<2+>流入の増大機構においてTRPC6チャネルの細胞内から細胞膜への移行が必須であることを明らかにした。2.Snapinの二量体化についてBiFC(Bimolecular fluorescence complementation)法を用いて検討した。その結果、Snapinは細胞膜近傍に局在していること、そのN末端を結合して二量体を形成すること、さらに受容体の活性化により二量体形成が増加することを明らかにした。3.α_<1A>サブタイプ以外のアドレナリン受容体がSnapinと相互作用する可能性について、イースト2ハイブリッド法を用いて検討した。その結果、α_<1B>,α_<1D>,β_1アドレナリン受容体サブタイプについては陽性の、また、α_<2A>,α_<2B>,α_<2C>,β_2,β_3については陰性の反応が得られたことから、Snapinが複数の受容体と相互作用する可能性が示唆された。

Private たちは, acceptor action Ca^<2+> inflow mechanism の一つとして, acceptor およびチャネルとinteraction するSnapin molecule が, acceptor activating を Receiver けて two-dimensional body を form成することにより"Acceptor-Snapin-チャネル" complex is formed, acceptorされたというシグナルをチャネルへ伝达するメカニズムを卡えている.そして, Snapin が plural の receptor や チ ャ ネ ル と interaction す る こ と に よ り, こ のCa^<2+> inflow mechanism が universality をhold つ と test え て い る. This year's results are as follows: 1. The activation of α_<1A> receptor is affected by the presence of the receptor in the cell and the surface of the cell membrane of TRPC6に流行することがCa^<2+>Flow into the increasing direct なメカニズムであることを、brefeldin A (タンパク Transportation Barrier) is used to solve the problem. brefeldin A treatment of cells and activation of α_<1A> receptorsこされるTRPC6 チャネルを Introduction するCa^<2+> inflow が出しく suppress されたことから、α_<1A> receptor action Ca^<2+> inflow amplification mechanism においてTR PC6 is necessary for intracellular migration of the cell membrane and migration of the cell membrane. 2.Snapin's BiFC (Bimolecular fluorescence complementation) method is used.その results, Snapin は cell membrane close to に し て い る こ と, そ の N-terminal を binding し て binaryを Formation of すること, さらにAcceptor activation and によりDouble formation of がincrease and することを明らかにした. 3. α_<1A>サブタイプのアドレレリンReceiverがSnapinとphase The possibility of interaction is the same as the possibility of interaction.そのRESULT,α_<1B>,α_<1D>,β_1アドレナリンReceiverサブタイプについてはpositiveの,また,α_<2A>,α_<2B>,α _<2C>,β_2,β_3についてはnegativeのanti応がgetられたことから, snapinがpluralのacceptorとinteractionするpossibilityがshow唆された.

项目成果

Visualization and tissue distribution of the α_<1L>, adrenoceptor in prostate by a fluorescence-labeled ligand, Alexa-488-silodosin.

通过荧光标记的配体 Alexa-488-西洛多辛对前列腺中的肾上腺素受体 α_<1L> 进行可视化和组织分布。

• 发表时间: 2010
• 期刊: J.Urol. 183
• 作者: Morishima S.;Suzuki F.;Nishimune A.;Yoshiki H.;Akino H.;Yokoyama O.;Muramatsu I.
• 通讯作者: Muramatsu I.