ヒト歯根膜幹細胞シートを用いた歯周組織の再生

本研究の目的はヒトperiodontal ligament stem cells(PDLSC)細胞シートを用いた歯周組織の再生の検討である。実施した研究の成果を述べる。1)PDLSCの培養および評価:抜去歯の根面より歯根膜組織を採取し、Trypsin-EDTAにて酵素処理を行った。酵素処理により得られた歯根膜細胞の中で、コロニーを形成し増殖してくる増殖活性の高い細胞をperiodontal ligament stem cells(PDLSC)と仮定し、実験に使用した。PDLSCは、骨芽細胞分化誘導培地にて培養後ALPの発現及びRT-PCRにて遺伝子発現について検討を行った。2)PDLSCシートの作製:酵素処理により得られたPDLSCを用い、温度応答性培養皿上にて3週間培養し作製した。3)ヌードラット下顎骨大臼歯根面に作製した欠損への細胞シートの移植実験の前段階としてシートをヌードラットの皮下に入れた象牙質の板上に重層させて移植:ヌードラットF344NJc1-rnu/rnu 5週齢オスを用いて実験群にPDLSCシートを設置、コントロール群にはperiodontal ligament cells(PDL)シートを設置し復位縫合。5週間の観察期間を設けた。4)組織観察:術後観察期間の後、脱灰組織切片を作製、ヘマトキシリンエオジン染色およびアザン染色を行い光学顕微鏡下にて組織観察を行った。5)結果・考察:本パイロット実験においては象牙質の板面にしめる新生セメント質%および新生歯根膜線維%、また新生セメント質厚さの項目について実験群およびコントロール群について有意な差は認めれなかった。組織の脱灰組織切片を作製の行程において移植シートが象牙質板からはがれてしまう部分が認められたため正確な評価にいたらなかったと考察される。ただし実験群において層板状の石灰化したセメント質様構造と,そこから直角に伸び出した歯根膜線維の形成が観察された部位も多く認められたことから今後脱灰組織切片作製の改善点を検討しヌードラット下顎骨大臼歯根面に作製した欠損への細胞シートの移植実験を行いPDLSC細胞シートを用いた歯周組織の再生について検討を行う予定である。

本研究の目的はヒトperiodontal ligament stem cells(PDLSC)細胞シートを用いた歯周組織の再生の検討である。実施した研究の成果を述べる。1)PDLSCの培養および評価:抜去歯の根面より歯根膜組織を採取し、Trypsin-EDTAにて酵素処理を行った。酵素処理により得られた歯根膜細胞の中で、コロニーを形成し増殖してくる増殖活性の高い細胞をperiodontal ligament stem cells(PDLSC)と仮定し、実験に使用した。PDLSCは、骨芽細胞分化誘導培地にて培養後ALPの発現及びRT-PCRにて遺伝子発現について検討を行った。2)PDLSCシートの作製:酵素処理により得られたPDLSCを用い、温度応答性培養皿上にて3週間培養し作製した。3)ヌードラット下顎骨大臼歯根面に作製した欠損への細胞シートの移植実験の前段階としてシートをヌードラットの皮下に入れた象牙質の板上に重層させて移植:ヌードラットF344NJc1-rnu/rnu 5週齢オスを用いて実験群にPDLSCシートを設置、コントロール群にはperiodontal ligament cells(PDL)シートを設置し復位縫合。5週間の観察期間を設けた。4)組織観察:術後観察期間の後、脱灰組織切片を作製、ヘマトキシリンエオジン染色およびアザン染色を行い光学顕微鏡下にて組織観察を行った。5)結果・考察:本パイロット実験においては象牙質の板面にしめる新生セメント質%および新生歯根膜線維%、また新生セメント質厚さの項目について実験群およびコントロール群について有意な差は認めれなかった。組織の脱灰組織切片を作製の行程において移植シートが象牙質板からはがれてしまう部分が認められたため正確な評価にいたらなかったと考察される。ただし実験群において層板状の石灰化したセメント質様構造と,そこから直角に伸び出した歯根膜線維の形成が観察された部位も多く認められたことから今後脱灰組織切片作製の改善点を検討しヌードラット下顎骨大臼歯根面に作製した欠損への細胞シートの移植実験を行いPDLSC細胞シートを用いた歯周組織の再生について検討を行う予定である。