イメージングによる抗HIV因子の時空間的解析

影像学抗HIV因子时空分析

• 批准号: 09J01659
• 负责人: 河野 健
• 金额: $ 0.9万
• 依托单位: Osaka University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for JSPS Fellows
• 财政年份: 2009
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2009 至 2010
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-09J01659/
• 关键词: HIV; リアルタイムイメージング; 蛍光抗体染色法; Vpr; uncoating; TRIM5α; 蛍光抗体免疫染色法

HIVの細胞内へ侵入後の感染分子メカニズムは、これまでの生化学的手法では解析が困難であった。申請者は顕微鏡によるイメージング技術によって、細胞侵入後のウイルスの感染メカニズムを明らかにしようと試みた。HIVは細胞に感染後、自身のゲノムRNAを包む砲弾状のコアを崩壊させ1本鎖RNAを2本鎖DNAに変換する逆転写を行う。コアはキャプシドで形成されており、このコアの崩壊の事をuncoatingと呼ぶ。前年度、申請者は蛍光タンパク質でウイルス粒子をラベルし、蛍光顕微鏡で細胞内に侵入したウイルス粒子だけ検出する事に成功している。このラベルウイルスを細胞に感染させ、感染後、継時的に細胞を固定、抗キャプシド抗体で染色する事でこれまで謎であったuncoatingの速度を測定する事に成功した。申請者の所属する研究室では、これまでにサル細胞で増殖が可能になったサル指向性HIV-1の作製に成功している。このサル指向性HIV-1はキャプシドの一部とウイルスアクセサリータンパク質であるVifがサルで増殖可能なウイルスSIVmac239の物と置換されている。このウイルスはカニクイザル細胞での増殖は向上していたが、ヒト細胞では逆に低下していた。この理由を調べるために、ヒト細胞でのサル指向性HIV-1のuncoating速度を測定した。その結果、サル指向性HIV-1は元々の野生型HIV-1と比べuncoatingの速度が遅くなっていることがわかった。またヒト細胞で馴化させ、増殖能が向上したサル指向性HIV-1のuncoating速度は野生型HIV-1に近づいていた。以上の結果、サル指向性HIV-1はuncoatingの速度が遅くなることでヒト細胞での増殖能が低下していると考えられた。この結果はこれまでブラックボックスであった、細胞内侵入後のウイルスの挙動を調べた重要な知見であり、今後、この顕微鏡を用いたウイルス粒子のイメージング技術によって、抗HIV-1因子等の様々な宿主タンパク質とウイルスとの関わりを解析できると考えている。

It is difficult to analyze HIV's infectious molecules after they have invaded the cells using biochemical techniques. Applicant: Microscope Microscope Technology, Cell Invasion后のウイルスの infectionメカニズムを明らかにしようとtestみた. After the HIV cells are infected, their own RNA is broken down into a cannon-like shape, and the RNA is locked and the DNA is locked.コアはキャプシドで Formation されており, このコアの壊の事をuncoatingとHUぶ. In the previous year, the applicant was は蛍光タンパク性でウイルス片をラベルし, 蛍光顕Microscopic examination of intracellular invasion of microscopic particles has led to success.このラベルウイルスを cell infection, させ after infection, にcell を fixation at the time of infection, anti-キャプシド antibodyでdyeingする事でこれまでmysteryであったuncoatingのspeedをdeterminationする事に成した. The applicant's affiliated research laboratory has successfully produced HIV-1-directed HIV-1 based on cell proliferation and reproduction. HIV-1 directional HIV-1 HIV-1あるVifがサルで multiplypossibleなウイルスSIVmac239の物と Replacementされている.このウイルスはカニクイザル Cells でのproliferation は upward していたが, ヒト cells では inverse に していた. The reason is the measurement of the uncoating speed of the HIV-1 cells and the directionality of the cells.その results, サル directional HIV-1 は元 々のwild-type HIV-1 と than べuncoating のspeed が遅くなっていることがわかった. The cells are domesticated, the proliferation ability is up, the directionality of HIV-1 is uncoating, and the speed of wild-type HIV-1 is close. The above results show that HIV-1 has a low rate of uncoating and a low reproductive capacity of cells.このRESULTS はこれまでブラックボックスであった、のウイ after intracellular invasionルスの挙动を动べたimportantな知见であり、From now on、この顕Microscope を用いたウイルス particle technology, anti-HIV-1 factor, etc.なhost タンパク性とウイルスとの关わりをanalytic できると考えている.

项目成果

Simian-tropic HIV-1 NL-4/5S6/7SVifS shows slower capsid uncoating in human cells

猿类 HIV-1 NL-4/5S6/7SVifS 显示人类细胞中衣壳脱壳速度较慢

• 发表时间: 2011
• 作者: Takaguchi;M.;Takahashi;T.;Hosokawa;C.;Ueyama;H.;Fukushima;K.;Hayakawa;T.;Ttoh;K.;Ikeda;K.;and Suzuki;T;Kono K.
• 通讯作者: Kono K.

Impact of a single amino acid in the variable region 2 of the Old World monkey TRIM5α SPRY(B30.2)domain on anit-human immunodeficiency virus type 2

旧世界猴TRIM5α SPRY(B30.2)结构域可变区2中单个氨基酸对抗人免疫缺陷病毒2型的影响

• 发表时间: 2009
• 期刊: Virology 388
• 作者: Yuka Morita;Naoshi Hiramatsu;Toshiaki Fujita;Haruna Amano;Takashi Todo;Akihiko Hara;盛田祐加;Junichi Hirano;Junichi Hirano;Junichi Hirano;平野淳一;Junichi Hirano;平野淳一;盛本圭一;Keiichi Morimoto;中木戸誠;中木戸誠;水野彰;水野彰;河野健
• 通讯作者: 河野健

アカゲザルTRIM5aαHIV-2/SIVmacキャプシドの複数領域を認識する

识别恒河猴 TRIM5aαHIV-2/SIVmac 衣壳的多个区域

• 发表时间: 2010
• 作者: Yuka Morita;Naoshi Hiramatsu;Toshiaki Fujita;Haruna Amano;Takashi Todo;Akihiko Hara;盛田祐加;Junichi Hirano;Junichi Hirano;Junichi Hirano;平野淳一;Junichi Hirano;平野淳一;盛本圭一;Keiichi Morimoto;中木戸誠;中木戸誠;水野彰;水野彰;河野健;河野健
• 通讯作者: 河野健