エゾサンショウウオにおける温度依存的な性決定・性分化機構の解析

虾夷蝾螈温度依赖性性别决定和性别分化机制分析

基本信息

  • 批准号:
    09J01941
  • 负责人:
  • 金额:
    $ 0.9万
  • 依托单位:
  • 依托单位国家:
    日本
  • 项目类别:
    Grant-in-Aid for JSPS Fellows
  • 财政年份:
    2009
  • 资助国家:
    日本
  • 起止时间:
    2009 至 2010
  • 项目状态:
    已结题

项目摘要

性転換個体の遺伝的な性を判別するためのW染色体特異的分子マーカーを作製するため、雌雄個体から抽出したゲノムDNAを20数種類の制限酵素で消化し、電気泳動で検出された雌特異的な反復配列のクローニングを行った。しかし、W染色体特異的分子マーカーを作製することができなかった。そこで、雌雄のゲノムDNAをテンプレートとして使用しランダムプライマーを用いてPCRを行うRAPD解析を行い、アクリルアミドゲルを用いた電気泳動により、メス特異的に検出されたDNAバンドからW特異的なフラグメントのクローニングを試みた。300通りのプライマーの組み合わせを行ったが、この実験でもメス特異的なバンドを検出することができなかった。次に、本研究での発現解析のためにクローニングした、性分化関連遺伝子のサンショウウオホモログの染色体マッピングを行うことで、エゾサンショウウオの性染色体連鎖遺伝子を同定し、その遺伝子のZ染色体連鎖ホモログとW染色体連鎖ホモログの塩基配列を詳細に解析することで、新たな性判別マーカーを作製することができるのではないかと考えた。しかしながら、単離されたすべての性分化関連遺伝子はエゾサンショウウオでは常染色体にマップし、性染色体連鎖遺伝子を同定することができなかった。今後はまだ単離していない性分化関連遺伝子などの機能遺伝子のサンショウウオホモログのクローニング・染色体マッピングを行い、新たな性連鎖遺伝子を同定することで、性判別マーカーの作製を試みている。しかしながら、サンショウウオの染色体標本は非常に難しく、現在の方法では良好な染色体標本を数多く得ることが困難である。したがって、今後は染色体標本作製における細胞培養方法を新たに確立する必要がある。
In terms of sex, the molecular markers of W chromosomal specificity, the restriction enzyme digestion assay and the electrophoretic assay were used to identify the molecular markers of W chromosome specificity, the restriction enzyme digestion and electrophoretic analysis of the molecular markers of W chromosomal specificity, 20 of which were extracted by male and female individuals. The molecules of chromosome W and W chromosome are known to be specific to each other. In both sexes, both sexes are responsible for the use of DNA. Both sexes are interested in the use of real-time PCR to analyze the RAPD, to make sure that they do not use real-time electrophoretic swimming, and to make sure that they do not know how to do this. They do not know how to do this. 300. Please tell me that you need to make sure that you do not know how to do this, and that you have to pay attention. In the second part of this study, we found that there were some problems in the analysis of the sex chromosomes, the homology of the sex chromosomes, the Z chromosome links, the W chromosome links, the W chromosome links, the base arrangement, the sequence of the chromosomes, the chromosomes. The new policy is to determine whether or not you are going to do something. The children were divided into two groups: autosomal, sex chromosomes, sex chromosomes, and sex chromosomes. In the future, we will be able to do so in the future. In the future, we will be able to do so in the future. In the future, we will be able to do this in the future. In the future, we will be able to determine the number of chromosomes, the level of sexual differentiation, and the level of sex. The number of chromosome tags in the current method is very high, and the number of chromosome tags in the current method is very good. In the future, the chromosome marker will be used as a new method of cell culture.

项目成果

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