染色体工学を応用した次世代型遺伝子改変マウス作製技術の開発

利用染色体工程开发下一代转基因小鼠生产技术

• 批准号: 09J04255
• 负责人: 山口 繁幸
• 金额: $ 1.28万
• 依托单位: Tottori University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for JSPS Fellows
• 财政年份: 2009
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2009 至 2010
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-09J04255/
• 关键词: トランスクロモソミックマウス; 染色体工学; ヒト人工染色体ベクター

複数の遺伝子を導入できるMultiple Gatewayシステムを搭載した人工染色体ベクターと、効率的な子孫伝達が可能な遺伝子改変マウス作製法を併用することで、遺伝子挿入部位の位置効果による発現消失や宿主側の染色体上の遺伝子破壊をなくした上、サイズに関係なく複数の遺伝子・ゲノムを導入でき、効率的に子孫伝達するといった利点を備えたトランスクロモソミックマウスを作製することを目的に研究を進めている。本年度は、Multiple Gateway人工染色体ベクターへの効率的な遺伝子導入条件の確立と、そのベクターを用いた遺伝子導入細胞の作製について以下のように検討を行った。組換え酵素であるintegrase発現下で、外来遺伝子をMultiple Gateway人工染色体ベクター上に搭載するための至適導入条件を検討した。その結果、ほとんどの条件でintegraseによる組換え効率は、広く使用されているCre、FLPeと比較して高かったことから、integraseは遺伝子導入に適していると考えられた。また、Multiple Gateway人工染色体ベクター上にEGFP遺伝子を導入して得られたコロニーでは、均質な発現を示すコロニーが多かった。これは、Multiple Gateway人工染色体ベクター上の決まった箇所に遺伝子が導入され、挿入部位の位置効果を受けにくいためではないかと考えられる。また、Multiple Gateway人工染色体ベクターがマウスA9細胞に移入でき、A9細胞においてもintegraseが機能したことは、様々な細胞でこのsystemが使用できる可能性を示唆している。こうして定めた条件をもとに、昨年度作製したNanog RFP IRES Neo BACのMultiple Gateway人工染色体ベクター上への搭載を試みている。本年度の目的の一つであった、Multiple Gateway人工染色体ベクターへの効率的な遺伝子導入条件の確立と、そのベクターを用いた遺伝子導入細胞の特性の検証を完了し、筆頭著者として2報の論文を投稿でき、本年度の研究実施計画を概ね達成できた。

Plural の伝子を Import できるMultiple Gateway's artificial chromosomes are equipped with artificial chromosomes, and the efficiency of the offspring is possible. The production method of masu is to combine the use of することで and the effect of the position of the insertion site of the crotch, and the crotch disappears on the chromosome of the host side.伝子波壊をなくした上、サイズに Relationship なくplural の伝子・ゲノムをINTRODUCTION でき、Efficient descendants 伝达するといった利点を备えたトランスクロモソミックマウスを することをPurpose に Research を入めている. This year, Multiple Establishment of the conditions for the introduction of the efficiency of the Gateway artificial chromosomeのベクターをUse いた缝子to introduce cells into the のについて following のように検question を行った. Integrated enzymes and integrated enzymes are present, and foreign genes and multiple gateway artificial chromosomes are mounted on the optimal introduction conditions.そのresult, ほとんどのconditionsでintegraseによるcombinationえefficiencyは, 広くUSEされているCre, FLPe compares high and high, integrates and integrates.また、Multiple Gateway artificial chromosomes are imported into the EGFP gene and are homogenized and homogenized.これは、Multiple Gateway Artificial Chromosome is designed to be used for the introduction of artificial chromosomes and the positioning effect of the insertion site.また、Multiple Gateway artificial chromosome transfer into A9 cells, A9 cells into raseがfunctionしたことは、様々なcellでこのsystemが use possibilityをshows instigationしている.こうしてdetermined condition をもとに, last year's production したNanog RFP IRES Neo BAC のMultiple Gateway artificial chromosome ベクター上への equipped with をtrial みている. This year’s purpose is one, multiple Establishment of the conditions for the introduction of な杝子 into the efficiency of Gateway artificial chromosomes, and the use of いた缝子 to import The verification of the characteristics of the cells has been completed, the written author has submitted the paper, and the research and implementation plan for this year has been completed.

项目成果

Advantages and applications of human artificial chromosome vector

人类人工染色体载体的优点及应用

• 发表时间: 2011
• 作者: Noguchi,K.;Nezu,I;山口繁幸;Kazunori Noguchi;山口繁幸;野口和則;遠藤克;野口和則;山口繁幸;遠藤克;Kazunori Noguchi;山口繁幸;Masaru Endou;Kazunori Noguchi;山口繁幸;山口繁幸;Kazunori Noguchi;山口繁幸
• 通讯作者: 山口繁幸

再生医療を目指した複数遺伝子搭載可能な改良型ヒト人工染色体(HAC)ベクターの開発

开发一种改进的人类人工染色体（HAC）载体，能够携带用于再生医学的多个基因

• 发表时间: 2011
• 作者: Noguchi,K.;Nezu,I;山口繁幸;Kazunori Noguchi;山口繁幸;野口和則;遠藤克;野口和則;山口繁幸
• 通讯作者: 山口繁幸

ヒト人工染色体(HAC)ベクターを用いた高機能で簡易な有害性評価代替法の開発

使用人类人工染色体 (HAC) 载体开发功能强大且简单的危险评估替代方法

• 发表时间: 2010
• 作者: Noguchi,K.;Nezu,I;山口繁幸;Kazunori Noguchi;山口繁幸;野口和則;遠藤克;野口和則;山口繁幸;遠藤克;Kazunori Noguchi;山口繁幸;Masaru Endou;Kazunori Noguchi;山口繁幸
• 通讯作者: 山口繁幸

複数遺伝子の搭載が可能な改良型ヒト人工染色体(HAC)ベクターの開発

开发可携带多个基因的改良人类人工染色体（HAC）载体

• 发表时间: 2010
• 作者: 佐藤法仁;阿戸学;松村隆之;山崎利雄;関塚剛史;黒田誠;中山真彰;井上哲圭;本田尚子;土田耕三;小林和夫;大原直也;山口繁幸
• 通讯作者: 山口繁幸

A method for producing transgenic cells using a multi-integrase system on a human artificial chromosome vector.

• DOI: 10.1371/journal.pone.0017267
• 发表时间: 2011-02-24
• 期刊: PloS one
• 影响因子: 3.7
• 作者: Yamaguchi S;Kazuki Y;Nakayama Y;Nanba E;Oshimura M;Ohbayashi T
• 通讯作者: Ohbayashi T