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分裂酵母Rhb1優性活性型変異体を用いた栄養飢餓応答シグナル伝達経路の解明

利用裂殖酵母Rhb1显性活性突变体阐明营养饥饿反应信号转导途径

基本信息

批准号：
09J04910
负责人：
村井朋香
金额：
$ 0.9万
依托单位：
Kyoto University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for JSPS Fellows
财政年份：
2009
资助国家：
日本
起止时间：
2009 至 2010
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-09J04910/
关键词：
細胞成長栄養飢餓アミノ酸取り込み低分子量GTPase 分裂酵母 Rheb TOR 減数分裂

项目摘要

申請した研究計画に基づき、Ras様低分子量GTPase Rhebの分裂酵母ホモログRhb1について、Rhb1優性活性型変異体を用いた解析を行った結果、Rhb1が、下流因子TORキナーゼを介したシグナル伝達によって窒素源枯渇時の応答を制御しているのに対して、窒素源豊富時にはTORキナーゼを介さない新規下流経路を制御していることを見出した。酵母モデル系から得た事実について、生物種を超えた保存性や生物学的意義を探究するため、培養細胞を用いて変異Rhebタンパク質の解析を行った。得られた2種類の変異体の変異部位はヒトから酵母までよく保存されたアミノ酸であったため、分裂酵母Rhb1変異をヒトRhebに導入し、培養細胞を用いて哺乳類におけるRhebシグナル伝達経路の分岐の意義を調べた。まず、変異Rheb発現細胞でのTORの活性化を検出した。その結果、酵母を用いた遺伝学的解析から予想された通り、2種類の変異体を発現させた哺乳類細胞ではTORへの活性能が大きく異なることが示された。次に、変異Rhebを発現させた細胞における、異常タンパク質の蓄積とそれに伴う異常な細胞死の誘導を調べた。その結果、異常タンパク質の蓄積はTOR経路の異常活性化変異体でのみ見られたため、TOR経路によって制御されている可能性が示唆された。さらに、変異Rhebを恒常的に発現させた哺乳類細胞株を用いて、変異Rheb特異的に相互作用するタンパク質を網羅的に探索した。その結果、野生型Rhebには結合しないが、変異Rhebにのみ相互作用するタンパク質の存在が示された。このタンパク質はRhebの新規エフェクター、あるいはRhebの下流の新規経路で働く因子であることが期待される。今後、質量分析によりこのタンパク質を同定し、Rheb経路との関わりを検証したい。

Please apply for the research project: basic DNA, Ras low molecular weight GTPase Rheb mitotic yeast, Rhb1 mitotic yeast, Rhb1 sexually active yeast, Rhb1, TOR, TOR, low molecular weight Saccharomyces cerevisiae, low molecular weight Saccharomyces cerevisiae. The source of asphyxiate is available to TOR users to introduce the new regulations and to control the outflow of air pollution caused by vehicle traffic. The meaning of the biology of yeast, yeast, Rheb, biology, biology. In this paper, we have obtained the expression of yeast in the body parts of the mammalian plant, the yeast, the yeast, the Rhb1, the yeast, the yeast, the yeast The Rheb shows that the cells are active and the TOR is active. The results of the experiment, the analysis of yeast science and technology, it is expected that there are significant differences in the viability of mammalian TOR cells in mammalian cells. In the second and second Rheb, you can see that the cells are dead and the cells are dead. The results show that the TOR system is always active, and the TOR system is responsible for the possibility of reducing the risk. The constant detection of mammalian cell lines by Rheb and the interaction between mammalian cell lines, which are specific to Rheb, will affect the exploration of the Internet. The results showed that there were significant differences in the results of the interaction between wild-type Rheb and wild-type Rheb genes. "Rheb", "Rheb", "new regulation", "factor", "look forward to". In the future, quantitative analysis is required to determine the same location, and the Rheb route is required to determine the correct location.