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がん間質を構成するヒト血管外膜由来間葉系幹/前駆細胞による腫瘍進展促進機構の解明

阐明构成癌基质的人血管外膜来源的间充质干/祖细胞促进肿瘤进展的机制

基本信息

批准号：
09J05981
负责人：
星野歩子
金额：
$ 1.28万
依托单位：
The University of Tokyo
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for JSPS Fellows
财政年份：
2009
资助国家：
日本
起止时间：
2009 至 2010
项目状态：
已结题

项目摘要

ヒト血管外膜由来線維芽細胞(hVAFs)による肺腺がん細胞株(A549)の腫瘍形成上昇機構の解明を行う為に、hVAFsよりもA549細胞の腫瘍形成促進能が低い肺組織由来線維芽細胞(hLFs)とhVAFsの遺伝子発現の網羅的解析を行った。その結果、肺腺がん患者のがん間質で発現が高いと予後不良が報告されているPodoplanin (PDPN)がhVAFsで発現が高いことが分かった。タンパク発現もwestern blot,flow cytometryで検討した結果hVAFsでhLFsより発現が高いことが分かった。FACSを用いてhVAFsにおけるPDPN陽性細胞と陰性細胞を分取し、それぞれをA549細胞とマウス皮下へ移植した結果、PDPN陽性細胞との共移植群で腫瘍形成が促進された。また、PDPN陽性とA549細胞共移植群の腫瘍形成時期はPDPN陰性群との共移植より早いが、腫瘍形成が確認出来てからの腫瘍体積の増加曲線はPDPN陽性共移植群と陰性共移植群で同様であることが分かった。同様の結果がhLFsにおけるPDPN陽性細胞と陰性細胞でも得られた。このことから、PDPN陽性細胞は腫瘍形成促進に寄与することが示唆され、hVAFsとhLFsに含まれるPDPN陽性細胞の量の差が腫瘍形成時期に違いが見られた理由である可能性が考えられた。更にPDPN陽性hVAFsとA549を共移植したマウスでよりリンパ節及び肺への転移が促進されていることが分かった。次に、hVAFsにおけるPDPN発現をshRNAにより抑制し、その時のA549腫瘍形成へ与える影響を調べると、hVAFsによるA549腫瘍形成促進が打ち消されることが確認できた。hVAFsにPDPNを強発現させると(>80%陽性)A549細胞の腫瘍形成率が上昇した。以上より、hVAFsにおけるPDPNは腫瘍形成能上昇に寄与する機能分子であることが分かった。

The mechanism of tumor formation in lung cancer cell line A549 was analyzed. hVAFs could promote tumor formation in lung cancer cell line A549. As a result, high levels of Podoplanin (PDPN) and hVAFs were found in interstitial tissues of lung cancer patients. Western blot,flow cytometry, hVAFs, hLFs, hVAFs, hVAFs. FACS was used to isolate PDPN-positive cells and PDPN-negative cells, and to promote tumor formation in the subcutaneous transplantation of A549 cells. The tumor formation period of PDPN-positive and A549 co-transplanted populations was reversed from PDPN-negative to co-transplanted populations. The same results were obtained for PDPN positive cells and PDPN negative cells. PDPN-positive cells were found to promote the formation of tumors, and the differences in the amount of PDPN-positive cells in hVAFs and hLFs were found in the formation of tumors. PDPN-positive hVAFs and A549 co-transplanted to the lung The hVAFs were found to inhibit the development of A549 tumors and to enhance the development of A549 tumors. The tumor formation rate of A549 cells increased after PDPN was strongly detected in hVAFs (>80% positive). PDPN is a functional molecule that can be used to form tumors.