UPLC/MSを用いた自然毒の迅速・高感度一斉分析および新規毒物の検索

使用 UPLC/MS 快速、高灵敏度地同时分析天然毒素并寻找新的有毒物质

基本信息

批准号：
21790606
负责人：
金子理奈
金额：
$ 2.58万
依托单位：
Nagoya University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
财政年份：
2009
资助国家：
日本
起止时间：
2009 至 2011
项目状态：
已结题

项目摘要

22年度は初年度に引き続きUPLC/MS/MSシステムを用いて、種々の毒物について、迅速・高感度検出及び定量法の開発を行った。我々は既にセミミクロLC/MSについて、体液中に含まれるアコニチンアルカロイド及びアマニチン類の分析法を確立しているが、感度や分析に要する時間は必ずしも満足のいくものではなかった。前述した毒物標準品のうちで特に分離が困難なアマニチンを用い、UPLCによる分離(分離カラムの選択、分離溶媒と分離勾配プログラムの検討)条件、質量分析装置のイオン化条件(スプレー電圧、イオン化モード)等について最適化を試みた。その結果、従来30分を要した分析時間を5分以内に短縮することができ、現在までに血清及び尿で検出限界濃度5ng/mLと、セミミクロLC/MSと同等の感度も得られている。ただ、試料間でのイオン強度のばらつきがやや大きいことが課題であるため、現在は特にイオン化効率への影響が大きい尿試料の精製法及び分析条件の最適化を行うことと、適当な内部標準物質の検索に重点をおいている。また我々は、向精神薬類の一斉分析法の開発も併せて行っている。これらの薬物の迅速分析は法医鑑定実務上非常に重要な位置を占めている。現在までに約50種類の薬物を4分以内という短時間に一斉同定することが可能である。また、検出限界濃度も概ね100pg/mL以下を達成している。また、体液のみならず毛髪や爪からの薬物検出も行い、ベンゾジアゼピン系向精神薬25種類の分析において50pg/mg程度の感度を得られるなど、良好な結果を得ている。

在2010财年，与第一年一样，我们使用UPLC/MS/MS系统开发了各种毒物的快速，高度敏感的检测和定量方法。我们已经建立了用于分析体液中半微粒/MS中包含的aconitine生物碱和氨基氨酸的方法，但是分析所需的灵敏度和时间不一定令人满意。在上述有毒标准产品之间特别难以分离的氨基氨酸被用来优化通过UPLC（选择分离柱的选择，分离溶剂和分离梯度程序的检查）以及质谱仪的电离条件（喷雾电压，电离模式）的分离条件。结果，以前需要30分钟的分析时间可以减少到5分钟或更短的时间，并且最新的是血清和尿液中的检测极限浓度，这等同于半微米LC/MS的检测极限。但是，问题在于，样品之间离子强度的变化略大，因此重点是优化尿液样品的纯化方法和分析条件，这些方法对电离效率和寻找适当的内标物质的影响特别大。我们还正在开发精神药物的同时分析。对这些药物的快速分析是法医评估实践中非常重要的立场。迄今为止，可以在4分钟内短时间内同时确定大约50种药物。在大约100 pg/mL或更少的情况下，还达到了检测极限浓度。此外，不仅在体液和头发和指甲中还进行药物检测，在分析25种苯二氮卓类精神药物时，获得了约50 pg/mg的敏感性。