新規コンドロイチン硫酸分解酵素の同定及び生体内での機能解明と応用

新型硫酸软骨素降解酶的鉴定、体内功能阐明及应用

• 批准号: 10J02003
• 负责人: 金岩 知之
• 金额: $ 0.9万
• 依托单位: Hokkaido University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for JSPS Fellows
• 财政年份: 2010
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2010 至 2011
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-10J02003/
• 关键词: コンドロイチン硫酸; ヒアルロニダーゼ; 加水分解酵素; ヒアルロン酸; グリコサミノグリカン

ヒアルロン酸(HA)分解酵素であるヒアルロニダーゼ(HYAL)4がコンドロイチン硫酸(CS)を特異的に分解する酵素であることを明らかした。そこでHYAL及びその関連遺伝子産物について基質特異性を詳細に解析し、HAとCSの基質認識の違いを生み出すアミノ酸配列を同定する。その結果を基に、より活性が強く、目的のCSを特異的に加水分解する新たな人工酵素の作製を目指す。また、これまで不明であったHYAL4の生体内での役割についても解明する。そのために、今年度は以下の研究を行った。1.基質特異性を決定するアミノ酸残基に関する研究:これまでにマウスHYAL4(mHyal4)はCS特異的な加水分解酵素であったが、その基質特異性はヒトとは異なっていることを明らかにした。ヒトとマウスの間でのHYAL4のアミノ酸配列の相同性は高く、わずかなアミノ酸の違いが両者の基質特異性の違いを生み出していると考えた。そこで、ヒトとマウスのHYAL4のキメラタンパク質等を作製し、基質特異性を生み出しているアミノ酸配列を決定した。その結果、特定のアミノ酸を変化させることによって、ヒトとマウスのHYAL4の基質特異性を変化させることに成功し、基質認識に重要なアミノ酸残基を同定した。さらに、これらの結果をまとめて、現在論文を投稿中である。2.HYAL4の生体内での役割に関する研究:mHyal4を安定的に発現している細胞株を樹立し、mHyal4が細胞表面で機能している可能性を示した。さらに、mHyal4を安定的に発現した株では、コントロールと比較してCS鎖が短くなっており、mHyal4がin vivoにおいてもCS鎖を分解することを示唆した。また、これまでに、mHyal4が精巣に特異的に発現していることを見出している。さらに詳細な解析の結果、精子の先端にmHyal4が発現していることを明らかにした。

The enzyme for the decomposition of sulfuric acid (CS) is known as HYAL, and the enzyme for the decomposition of HA is known as HYAL. A detailed analysis of matrix specificity in the production of HYAL and related gene products, and a determination of matrix alignment in HA and CS As a result, the enzyme activity is strong, and the target enzyme activity is high. In vivo, HYAL4 was isolated and identified. This year's research is conducted in the following ways. 1. Substrate-specific acid residue determination studies: this is the case with HYAL4(mHyal4), a CS-specific hydrolytic enzyme, and a substrate-specific enzyme. The identity of the acid sequence of HYAL4 is high, and the matrix specificity of HYAL4 is high. For example, if you want to make a decision on the quality of the product, you can make a decision on the acid alignment of the product. The results, specific amino acid residues, and matrix specificity of HYAL4 were determined successfully.さらに、これらの结果をまとめて、现在论文を投稿中である。2. Study on the isolation of mHyal4 in vivo: To demonstrate the possibility of stable mHyal4 development in cell lines and functional mHyal4 development on cell surfaces. In addition, mHyal4 is stable and stable. It is easy to compare CS lock with mHyal4 in vivo. The first one is the first one to appear. Detailed analysis of the results, sperm tip mHyal4 found in the morning

项目成果

マウスヒアルロニダーゼ4:コンドロイチン硫酸特異的加水分解酵素の同定

小鼠透明质酸酶 4：硫酸软骨素特异性水解酶的鉴定

• 发表时间: 2010
• 作者: Kenta Fujiu;Yoshitaka Nakayama;Hidetoshi Iida;Masahiro Sokabe;Kenjiro Yoshimura;中山 義敬;中山 義敬;中山義敬;中山義敬;中山義敬;Chizuru Akatsu;山田修平;本田智子;本田智子;Tomoyuki Kaneiwa;山田修平;本田智子;Tomoyuki Kaneiwa;Anzu Miyazaki;山田修平;Tomoyuki Kaneiwa;Shuhei Yamada;金岩知之;宮崎杏
• 通讯作者: 宮崎杏

Dermatan sulfate epimerase 2 is the predominant isozyme in the formation of the chondroitin sulfate/dermatan sulfate hybrid structure in postnatal developing mouse brain

• DOI: 10.1093/glycob/cwq208
• 发表时间: 2011-05-01
• 期刊: GLYCOBIOLOGY
• 影响因子: 4.3
• 作者: Akatsu, Chizuru;Mizumoto, Shuji;Sugahara, Kazuyuki
• 通讯作者: Sugahara, Kazuyuki

Mouse hyaluronidase-4 : Identification of a chondroitin sulfate-specific hydrolase with distinct specificity from human hyaluronidase-4

小鼠透明质酸酶 4：鉴定硫酸软骨素特异性水解酶，其特异性与人透明质酸酶 4 不同

• 发表时间: 2011
• 作者: Kenta Fujiu;Yoshitaka Nakayama;Hidetoshi Iida;Masahiro Sokabe;Kenjiro Yoshimura;中山 義敬;中山 義敬;中山義敬;中山義敬;中山義敬;Chizuru Akatsu;山田修平;本田智子;本田智子;Tomoyuki Kaneiwa;山田修平;本田智子;Tomoyuki Kaneiwa;Anzu Miyazaki;山田修平;Tomoyuki Kaneiwa;Shuhei Yamada
• 通讯作者: Shuhei Yamada

ヒアルロニダーゼのコンドロイチン硫酸加水分解活性の定量

透明质酸酶硫酸软骨素水解活性的定量

• 发表时间: 2011
• 作者: Kenta Fujiu;Yoshitaka Nakayama;Hidetoshi Iida;Masahiro Sokabe;Kenjiro Yoshimura;中山 義敬;中山 義敬;中山義敬;中山義敬;中山義敬;Chizuru Akatsu;山田修平;本田智子;本田智子
• 通讯作者: 本田智子

Mouse hyaluronidase 4 : identification of a chondroitin sulfate-specific hydrolase activity.

小鼠透明质酸酶 4：硫酸软骨素特异性水解酶活性的鉴定。

• 发表时间: 2011
• 作者: Kenta Fujiu;Yoshitaka Nakayama;Hidetoshi Iida;Masahiro Sokabe;Kenjiro Yoshimura;中山 義敬;中山 義敬;中山義敬;中山義敬;中山義敬;Chizuru Akatsu;山田修平;本田智子;本田智子;Tomoyuki Kaneiwa;山田修平;本田智子;Tomoyuki Kaneiwa;Anzu Miyazaki
• 通讯作者: Anzu Miyazaki