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アニオン交換輸送体AE1の膜トラフィック制御メカニズム

阴离子交换转运蛋白AE1的膜交通控制机制

基本信息

批准号：
10J05021
负责人：
大津航
金额：
$ 1.34万
依托单位：
Hokkaido University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for JSPS Fellows
财政年份：
2010
资助国家：
日本
起止时间：
2010 至 2012
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-10J05021/
关键词：
膜タンパク質 Anion Exchanger 1 小胞体 COPII小胞輸送モチーフ AE1 COPII小胞輸送

项目摘要

分泌タンパク質や膜タンパク質は小胞体(ER)で産生され、内在アミノ酸配列による輸送モチーフによって選別され、細胞内の適切な場に輸送されその機能を発揮する。申請者らは、牛AE1のN末端近傍に存在するΦXΦXΦ(Φは疎水性アミノ酸、Xは任意のアミノ酸を表す)配列が小胞体からゴルジ装置(Golgi)への輸送を効率化していることを明らかにしてきた。本研究の最終目的は「新規モチーフ配列によるER-Golgi間輸送の分子基盤の解明」である。この新規配列がタンパク質間相互作用に重要であるとの仮説のもと、ΦXΦXΦ配列と結合するタンパク質の同定を試みた。AE1のN末端領域を含むペプチドを精製し、それをBaitとして用いてHEK293T細胞の細胞可溶化物と反応させたところ、牛AE1のN末端領域を含むペプチド(ΦXΦXΦ配列を含む)と特異的に結合する、見かけの分子量が約120kDaと85kDaのタンパク質が検出された。それらのバンド抽出物に対しFT-MS/MSによる質量分析を行った結果、それぞれの抽出物からSec24アイソフォームCとSec23アイソフォームAのペプチドが同定され、特異抗体を用いたイムノブロットおいても、実際にそれらのタンパク質のシグナルが検出された。さらに詳細な解析の結果、牛AE1のN末端ペプチドはCOPII小胞複合体のうちSec24Cと直接結合しており、その相互作用にSec24Cの895番目から897番目のアミノ酸配列(L895IL)が重要な役割を果たしていることが明らかとなった。以上の結果から、ΦXΦXΦ配列は新規モチーフ配列としてSec24に認識されることによって、ER-Golgi間の輸送を効率化していることが実証された。

Secretion and membrane transport of ERs are essential for the production of ERs, the selection of ERs, and the transport of ERs within cells in appropriate fields. The applicant arranges the transport efficiency of the small cell separation device (Golgi) near the N-terminal of AE1 with ΦXΦXΦ(Φ X Φ X ΦThe ultimate goal of this study is to elucidate the molecular matrix of ER-Golgi transport in the context of new alignment. The new alignment is important for the interaction between particles and masses, and the new alignment is important for the interaction between particles and masses The N-terminal domain of AE1 was purified, baited and used in HEK293 T cell soluble products. The N-terminal domain of AE1 was purified, baited and used in HEK293 T cell soluble products. The molecular weight of AE1 was about 120kDa and 85kDa. The results of mass analysis for FT-MS/MS of the extract, the determination of the extract from Sec24 to Sec23, the use of specific antibodies, and the identification of the extract from Sec 24 to Sec23 were analyzed. The results of detailed analysis showed that the N-terminal fragment of AE1 was directly bound to the COPII cell complex, and the interaction between the 895 fragment of Sec 24 C and the 897 fragment of COPII cell complex (L895IL) was important. The above results show that the new configuration of ΦXΦXΦ is correct, and the transmission efficiency between ER-Golgi is correct.