Role of extracellular vesicles in the progression of macular degeneration

加齢黄斑変性は、加齢とともに黄斑の障害が不可逆的に進行し失明に至る網膜変性疾患である。世界的な高齢化傾向に伴い増加傾向にあるが、特に萎縮型とよばれるタイプでは有効な治療がないため、治療薬の開発が大きな課題となっている。申請者はプラスミドDNAを用いたマウスの錐体細胞優位に遺伝子導入する技術を開発し、視細胞における後期エンドソームの機能と役割を明らかにしてきた。後期エンドソームは多胞体とも呼ばれ、他の細胞への情報伝達を担っている細胞外小胞形成の場である。網膜の視細胞の特に外節の基部では多数の細胞外小胞が観察されることが古くから知られている一方で、これらの細胞外小胞の役割については多くは明らかになっていない。本研究では、網膜、特に視細胞における細胞外小胞の役割とそれらの分子基盤の解明を目的とする。当該年度は、細胞外小胞マーカーとして知られるテトラスパニン、CD63を基にしたレポーターを発現するプラスミドを作製し、マウス網膜由来細胞である661W細胞に発現させ、その分布を観察した。さらにin vivoの遺伝子導入技術を用いマウスの視細胞に発現にさせ、その分布を観察した。発現させたCD63レポーターは視細胞特異的テトラスパニンであるペリフェリン2とは異なる分布を示した。今後はこれらの作製したコンストラクトを用いて実験を実施し、細胞外小胞由来の成分について明らかにし、病態と関連する臨床応用可能なバイオマーカーの探索を試みる。

加齢黄斑変性は、加齢とともに黄斑の障害が不可逆的に進行し失明に至る網膜変性疾患である。世界的な高齢化傾向に伴い増加傾向にあるが、特に萎縮型とよばれるタイプでは有効な治療がないため、治療薬の開発が大きな課題となっている。申請者はプラスミドDNAを用いたマウスの錐体細胞優位に遺伝子導入する技術を開発し、視細胞における後期エンドソームの機能と役割を明らかにしてきた。後期エンドソームは多胞体とも呼ばれ、他の細胞への情報伝達を担っている細胞外小胞形成の場である。網膜の視細胞の特に外節の基部では多数の細胞外小胞が観察されることが古くから知られている一方で、これらの細胞外小胞の役割については多くは明らかになっていない。本研究では、網膜、特に視細胞における細胞外小胞の役割とそれらの分子基盤の解明を目的とする。当該年度は、細胞外小胞マーカーとして知られるテトラスパニン、CD63を基にしたレポーターを発現するプラスミドを作製し、マウス網膜由来細胞である661W細胞に発現させ、その分布を観察した。さらにin vivoの遺伝子導入技術を用いマウスの視細胞に発現にさせ、その分布を観察した。発現させたCD63レポーターは視細胞特異的テトラスパニンであるペリフェリン2とは異なる分布を示した。今後はこれらの作製したコンストラクトを用いて実験を実施し、細胞外小胞由来の成分について明らかにし、病態と関連する臨床応用可能なバイオマーカーの探索を試みる。