DNA脱メチル化に関与する新規遺伝子のクローニング

克隆参与 DNA 去甲基化的新基因

• 批准号: 21657044
• 负责人: 大石 一人
• 金额: $ 1.98万
• 依托单位: Osaka University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Challenging Exploratory Research
• 财政年份: 2009
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2009 至 2010
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-21657044/
• 关键词: DNAメチル化; エピジェネティクス; DNA脱メチル化酵素; 遺伝子発現; Ramos細胞

Ramos細胞(Burkittリンパ腫細胞株)において、GPI(glycosyl phosphatidyl inositol)アンカー型タンパクであるCD59の細胞表面での発現状態は、GPI合成酵素の1つであるPIG-M遺伝子のプロモーターのメチル化状態による遺伝子発現の有無により規定されていた。前年度の研究でメチル化した遺伝子のリプログラミング活性を有しているPig-mノックアウトES細胞からcDNAライブラリーを作製して、CD59の発現回復を指標に発現クローニングをおこなったところ、抗体と非特異的に結合するFcレセプター遺伝子が濃縮されきた。そこで今年度は、CD59抗体のF(ab')2フラグメントを作製しFcレセプター遺伝子が濃縮されてこない条件下でスクリーニングを行なったが、CD59の発現を回復する活性を持つ遺伝子は濃縮されてこなかった。この結果は、ライブラリーの品質が十分ではないのか、あるいはプロモーターの脱メチル化を誘導する遺伝子が単独で作用しているのではないということを示唆した。両方の可能性を考慮し、cDNAライブラリーを再度作製して発現クローニングにより遺伝子の同定を継続するとともに、Ramos細胞は自発的にCD59の発現を回復する集団を含んでいるので、CD59陽性と陰性の細胞集団を分画し、マイクロアレイにより両細胞集団で発現している遺伝子を比較し、プロモーターの脱メチル化に関連している遺伝子の同定を継続した。

The cell surface of Ramos cell (Burkitt cell strain), GPI (glycosyl phosphatidyl inositol) cell strain, CD59 cell surface, GPI synthetic enzyme, GPI synthesis enzyme, PIG-M cell, cell strain, GPI synthesis enzyme, cell cycle, cell surface, cell surface, cell surface, In the previous year, the results showed that the activity of the study showed that the activity was not specific in the combination of Pig-m, ES, cDNA, CD59, and non-specific antibodies. This year, the CD59 antibody F (ab') 2 was detected, and the Fc antibody was detected. Under the condition that the antibody F (ab') 2 was detected, the activity of the antibody F (FLV) was detected. The results show that the quality of the product is very bad, and that you are not aware of the results. The results show that there is a significant difference between the results and the results of the test. In this paper, the possibility of making a study of the possibility, cDNA, and so on, will be redone. In the same way, the CD59 of the Ramos cell will show that the cell collection contains the information of the cell, the CD59, the cell, the cell and the cell. I don't know what to do. I don't know. I don't know.