種々の細胞膜レセプターからのシグナル伝達におけるGPIアンカーの役割

GPI锚在各种细胞膜受体信号转导中的作用

• 批准号: 11770171
• 负责人: 大石 一人
• 金额: $ 1.41万
• 依托单位: Osaka University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
• 财政年份: 1999
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1999 至 2000
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-11770171/
• 关键词: GPIアンカー; トランスアミダーゼ; GAA1; GPI8; 翻訳後修飾

本研究の課程で、GPIアンカーをタンパク質に転移するステップに関与しているトランスアミダーゼは少なくともGAA1とGPI8の2つの遺伝子産物の複合体であり、GAA1はGPIアンカー型タンパク質とトランスアミダーゼとの酵素-基質中間体の形成に、GPI8は中間体形成にそのシステイン残基が必須であり、GPIアンカー付加シグナルの切断・除去に働いていることを明らかにした。1、GAA1とGPI8にそれぞれFLAGとGSTのタグをつけてCHO細胞に導入し、可溶化後抗FLAG抗体でGAA1を免疫沈降すると、GPI8が特異的に共沈してきたことから、2つの遺伝子産物は複合体を形成していることが明らかになった。2、ノックアウト細胞株を作製し解析したところ、GAA1はGPIアンカーのタンパク質への転移に必須なこと、GPIアンカー型タンパク質とトランスアミダーゼとの酵素-基質中間体の形成のステップに働いていることを明らかにした。3、GPI8は、ある種のシステインプロテアーゼと相同性を持つことから、このプロテアーゼファミリーに属する全てのメンバーにおいて保存され、活性に重要であると予想されるヒトGPI8の164番目のヒスチジンあるいは206番目のシステインをアラニンに変えた変異体を作成した。これらの変異体ではその活性および酵素-基質中間体の形成が完全に消失したことから、GPI8はGPIアンカー付加シグナルの切断・除去に働いていることを明らかにした。以上の結果をMol.Biol.Cell(2000)11:1523-1533に発表した。

In the course of this study, GPI was used for the formation of enzyme-substrate intermediates and GPI 8 was used for the formation of intermediate residues. The GPI is open to the public. 1. GAA1 and GPI8 are introduced into CHO cells, anti-FLAG antibody is immunoprecipitated after solubilization, GPI8 is specific for co-precipitation, 2. The complex of GAA1 and GST is formed. 2. GAA1 is required for the production of GPI, GPI. 3. GPI8 maintains the identity of the species, preserves the identity of the species, and maintains the identity of the species. GPI8 maintains the identity of the species, preserves the identity of the species, and maintains the identity of the species. GPI8 maintains the identity of the species. The activity of the enzyme and matrix intermediates in the formation of these different enzymes has completely disappeared, and the GPI8 has been removed. The above results are presented in Mol.Biol.Cell(2000)11:1523-1533.

项目成果

Ohishi K.et al.: "Gaalp and Gpi8p are components of a GPI transamidase that mediates attachment of glycosylphosphatidylinositol to proteins"Mol. Biol. Cell. (in press). 2000

Ohishi K.等人：“Gaalp 和 Gpi8p 是 GPI 转酰胺酶的组成部分，介导糖基磷脂酰肌醇与蛋白质的附着”Mol.

Ohishi,k. et al.: "Gaa1p and Gpi8p are components of a GPI transamidase that mediates attachment of glycosylphosphatidylinositol to proteins."Mol.Biol.Cell. 11. 1523-1533 (2000)

大石，K.

Hong, Y.et al.: "GPI1 stabilizes an enzyme essential in the first step of glycosylphosphatidylinositol biosynthesis"J.Biol.Chem.. 274. 18582-18588 (1999)

Hong, Y.等人：“GPI1 稳定糖基磷脂酰肌醇生物合成第一步中必需的酶”J.Biol.Chem.. 274. 18582-18588 (1999)

Hong,Y. et.al.: "Requirement of PIG-F and PIG-O for transferring phosphoethanolamine to the third mannose in glycosylphosphatidylinositol."J.Biol.Chem.. 275. 20911-20919 (2000)

洪，Y.

Inoue N.et al.: "Human and mouse GPAA1(Glycosylposphatidylinositol anchor attachment 1) genes: genomic structure, chromosomal loci and the presence of a minor class intron"Gytogenet. Cell Genet.. 84. 199-205 (1999)

Inoue N.等人：“人类和小鼠 GPAA1（糖基磷脂酰肌醇锚定附件 1）基因：基因组结构、染色体位点和小类内含子的存在”Gytogenet。