種々の細胞膜レセプターからのシグナル伝達におけるGPIアンカーの役割

GPI锚在各种细胞膜受体信号转导中的作用

• 批准号: 11770171
• 负责人: 大石 一人
• 金额: $ 1.41万
• 依托单位: Osaka University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
• 财政年份: 1999
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1999 至 2000
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-11770171/
• 关键词: GPIアンカー; トランスアミダーゼ; GAA1; GPI8; 翻訳後修飾

本研究の課程で、GPIアンカーをタンパク質に転移するステップに関与しているトランスアミダーゼは少なくともGAA1とGPI8の2つの遺伝子産物の複合体であり、GAA1はGPIアンカー型タンパク質とトランスアミダーゼとの酵素-基質中間体の形成に、GPI8は中間体形成にそのシステイン残基が必須であり、GPIアンカー付加シグナルの切断・除去に働いていることを明らかにした。1、GAA1とGPI8にそれぞれFLAGとGSTのタグをつけてCHO細胞に導入し、可溶化後抗FLAG抗体でGAA1を免疫沈降すると、GPI8が特異的に共沈してきたことから、2つの遺伝子産物は複合体を形成していることが明らかになった。2、ノックアウト細胞株を作製し解析したところ、GAA1はGPIアンカーのタンパク質への転移に必須なこと、GPIアンカー型タンパク質とトランスアミダーゼとの酵素-基質中間体の形成のステップに働いていることを明らかにした。3、GPI8は、ある種のシステインプロテアーゼと相同性を持つことから、このプロテアーゼファミリーに属する全てのメンバーにおいて保存され、活性に重要であると予想されるヒトGPI8の164番目のヒスチジンあるいは206番目のシステインをアラニンに変えた変異体を作成した。これらの変異体ではその活性および酵素-基質中間体の形成が完全に消失したことから、GPI8はGPIアンカー付加シグナルの切断・除去に働いていることを明らかにした。以上の結果をMol.Biol.Cell(2000)11:1523-1533に発表した。

This study の course で, GPI ア ン カ ー を タ ン パ ク qualitative に planning move す る ス テ ッ プ に masato and し て い る ト ラ ン ス ア ミ ダ ー ゼ は less な く と も GAA1 と GPI8 の 2 つ の heritage 伝 zi chan content の complex で あ り, GAA1 は GPI ア ン カ ー type タ ン パ ク qualitative と ト ラ ン ス ア ミ ダ ー ゼ と の に intermediates の enzyme - matrix formation , GPI8 は intermediates formed に そ の シ ス テ イ ン residues が must で あ り, GPI ア ン カ ー plus シ グ ナ ル の cut, to remove に 働 い て い る こ と を Ming ら か に し た. 1, GAA1 と GPI8 に そ れ ぞ れ FLAG と GST の タ グ を つ け て CHO cells に import し, solubilization and resistance FLAG antibody で GAA1 を immune sink す る と, GPI8 が specific に shen total し て き た こ と か ら, 2 つ の heritage 伝 zi chan formation は complex を し て い る こ と が Ming ら か に な っ た. 2, ノ ッ ク ア ウ ト し parse the cell lines を cropping し た と こ ろ, GAA1 は GPI ア ン カ ー の タ ン パ ク qualitative へ の planning must move に な こ と, GPI ア ン カ ー type タ ン パ ク qualitative と ト ラ ン ス ア ミ ダ ー ゼ と intermediates の の enzyme - matrix form の ス テ ッ プ に 働 い て い る こ と を Ming ら か に し た. 3, GPI8 は, あ る kind の シ ス テ イ ン プ ロ テ ア ー ゼ と identity を hold つ こ と か ら, こ の プ ロ テ ア ー ゼ フ ァ ミ リ ー に genus す る full て の メ ン バ ー に お い て save さ れ, active に important で あ る と to think さ れ る ヒ ト GPI8 の 164's mesh の ヒ ス チ ジ ン あ る い は 206's mesh の シ ス テ イ ン を ア ラ ニ ン Youdaoplaceholder0 changes えた variants を are made into た た. こ れ ら の - variant で は そ の active お よ intermediates の び enzyme - matrix form が に disappear completely し た こ と か ら, GPI8 は GPI ア ン カ ー plus シ グ ナ ル の cut, to remove に 働 い て い る こ と を Ming ら か に し た. The above <s:1> results をMol.Biol.Cell(2000)11:1523-1533に show た.

项目成果

Ohishi K.et al.: "Gaalp and Gpi8p are components of a GPI transamidase that mediates attachment of glycosylphosphatidylinositol to proteins"Mol. Biol. Cell. (in press). 2000

Ohishi K.等人：“Gaalp 和 Gpi8p 是 GPI 转酰胺酶的组成部分，介导糖基磷脂酰肌醇与蛋白质的附着”Mol.

Ohishi,k. et al.: "Gaa1p and Gpi8p are components of a GPI transamidase that mediates attachment of glycosylphosphatidylinositol to proteins."Mol.Biol.Cell. 11. 1523-1533 (2000)

大石，K.

Hong, Y.et al.: "GPI1 stabilizes an enzyme essential in the first step of glycosylphosphatidylinositol biosynthesis"J.Biol.Chem.. 274. 18582-18588 (1999)

Hong, Y.等人：“GPI1 稳定糖基磷脂酰肌醇生物合成第一步中必需的酶”J.Biol.Chem.. 274. 18582-18588 (1999)

Hong,Y. et.al.: "Requirement of PIG-F and PIG-O for transferring phosphoethanolamine to the third mannose in glycosylphosphatidylinositol."J.Biol.Chem.. 275. 20911-20919 (2000)

洪，Y.

Inoue N.et al.: "Human and mouse GPAA1(Glycosylposphatidylinositol anchor attachment 1) genes: genomic structure, chromosomal loci and the presence of a minor class intron"Gytogenet. Cell Genet.. 84. 199-205 (1999)

Inoue N.等人：“人类和小鼠 GPAA1（糖基磷脂酰肌醇锚定附件 1）基因：基因组结构、染色体位点和小类内含子的存在”Gytogenet。