種々の細胞膜レセプターからのシグナル伝達におけるGPIアンカーの役割
GPI锚在各种细胞膜受体信号转导中的作用
基本信息
- 批准号:13770160
- 负责人:
- 金额:$ 1.34万
- 依托单位:
- 依托单位国家:日本
- 项目类别:Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
- 财政年份:2000
- 资助国家:日本
- 起止时间:2000 至 2001
- 项目状态:已结题
- 来源:
- 关键词:
项目摘要
以前、我々はGPIアンカーをタンパク質に転移するステップに関与しているトランスアミダーゼは、GAA1とGPI8の2つの遺伝子産物の複合体であることを報告したが、本研究の課程で、2つの新規コンポーネントPIG-SおよびPIG-Tを同定し機能を解析した。1、GPI8にFLAGおよびGSTのタグをつけて、GPI8の欠損細胞株に発現させ、抗FLAG抗体およびグルタチオンビーズでトランスアミダーゼを精製した。この精製サンプルには4つのタンパク質が含まれていたので、そのN末端のアミノ酸シークエンスを行った。その結果、2つは既知のGAA1とGPI8であったが、あとの2つは新規のコンポーネントでありPIG-SおよびPIG-Tと命名し、遺伝子をクローニングした。2、PIG-SおよびPIG-Tのノックアウト細胞株を作製し解析したところ、PIG-SおよびPIG-TはともにGPIアンカーのタンパク質への転移に必須なこと、GPIアンカー型タンパク質とトランスアミダーゼとの酵素-基質中間体の形成のステップに働いていることを明らかにした。3、4つのコンポーネントにそれぞれ異なるタグを付けてCHO細胞に導入し、可溶化後抗タグ抗体で免疫沈降し、それぞれのコンポーネント間の結合を調べたところ、GAA1とGPI8の発現はPIG-Tの発現に依存性であることから、PIG-Tはトランスアミダーゼの構築に重要な役割を果たしていることが明らかになった。以上の結果をEMBOJ.(2001)20:4088-4098に発表した。
In the past, we have reported on the complex of GAA1 and GPI8, and analyzed the functions of PIG-S and PIG-T in the course of this study. 1. GPI8 FLAG and GST gene mutation, GPI8 defective cell line development, anti-FLAG antibody mutation, GPI8 gene mutation and GPI 8 gene mutation. This is a fine system of four types of components, including the N-terminal and N-terminal components. The results of the study are as follows: GAA1, GPI8, PIG-S, PIG-T, PIG-T, PIG-S, PIG-S, PIG-T, PIG-S, PIG-S, PIG-T, PIG-S, PIG-T, PIG-S, PIG-S, PIG-T, PIG-S, PIG-S, PIG-S 2. PIG-S and PIG-T cell lines are used for the production and analysis of PIG-S and PIG-T cells. 3. 4. Anti-CHO antibodies are introduced into CHO cells, solubilized, and bound to CHO cells. GAA1 is dependent on the development of PIG-T in GPI8. The above results are EMBOJ. (2001)20:4088-4098.
项目成果
期刊论文数量(2)
专著数量(0)
科研奖励数量(0)
会议论文数量(0)
专利数量(0)
Ohishi, K.et al.: "PIG-S and PIG-T, essential for GPI-anchor attachment to proteins, form a complex with GAA1 and GPI8"EMBO J.. 20. 4088-4098 (2001)
Ohishi, K. 等人:“PIG-S 和 PIG-T 对于 GPI 锚定附着到蛋白质而言至关重要,与 GAA1 和 GPI8 形成复合物”EMBO J.. 20. 4088-4098 (2001)
- DOI:
- 发表时间:
- 期刊:
- 影响因子:0
- 作者:
- 通讯作者:
Maeda, Y.et al.: "PIG-M transfers the first mannose to glycosylphosphatidylinositol on the lumenal side of the ER"EMBO J.. 20. 250-261 (2001)
Maeda, Y.等人:“PIG-M 将第一个甘露糖转移到 ER 腔侧的糖基磷脂酰肌醇”EMBO J.. 20. 250-261 (2001)
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