種々の細胞膜レセプターからのシグナル伝達におけるGPIアンカーの役割

点击翻译按钮获取中文摘要

GPIアンカーを夕冫パク質に転移するステップに関与しているトランスアミダーゼは少なくともGAA1とGPI8の2つの遺伝子産物の複合体であり、GAA1はGPIアンカー付加シグナルの認識に、GPI8はシステイン残基が活性に必須であり、GPIアンカー付加シグナルの切断・除去に働いていることを明らかにした。1、 GAA1とGPI8にそれぞれFLAGとGSTのタグをつけてCHO細胞に導入し、可溶化後抗FLAG抗体でGAA1を免疫沈降すると、GPI8が特異的に共沈してきたことから、2つの遺伝子産物は複合体を形成していることが明らかになった。2、 ヒトと酵母GAA1との間でキメラ分子を作成し、様々なGPIアンカー付加シグナルを認識できるかどうかを調べたところ、ヒトGAA1のC末側を酵母GAA1のC末部分に入れ換えると、酵母型の基質特異性を示したことから、GAA1のC末側にGPIアンカー付加シグナルの認識部位があること、すなわちGAA1は付加シグナルを認識していることを明らかにした。3、 GPI8はある種のシステインプロテアーゼと相同性を持つことから、このプロテアーゼファミリーに属する全てのメンバーにおいて保存され、活性に重要であると予想されるヒトGPI8の164番目のヒスチジンあるいは206番目のシステインをアラニンに変えた変異体を作成した。これらの変異体ではその活性は完全に消失したことから、GPI8はGPIアンカー付加シグナルの切断・除去に働いていることを明らかにした。