種々の細胞膜レセプターからのシグナル伝達におけるGPIアンカーの役割

GPI锚在各种细胞膜受体信号转导中的作用

• 批准号: 09770218
• 负责人: 大石 一人
• 金额: $ 1.28万
• 依托单位: Osaka University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
• 财政年份: 1997
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1997 至 1998
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-09770218/
• 关键词: GPIアンカー; トランスアミダーゼ; GAAI; GPI8; 翻訳後修飾; GAA1

GPIアンカーを夕冫パク質に転移するステップに関与しているトランスアミダーゼは少なくともGAA1とGPI8の2つの遺伝子産物の複合体であり、GAA1はGPIアンカー付加シグナルの認識に、GPI8はシステイン残基が活性に必須であり、GPIアンカー付加シグナルの切断・除去に働いていることを明らかにした。1、 GAA1とGPI8にそれぞれFLAGとGSTのタグをつけてCHO細胞に導入し、可溶化後抗FLAG抗体でGAA1を免疫沈降すると、GPI8が特異的に共沈してきたことから、2つの遺伝子産物は複合体を形成していることが明らかになった。2、 ヒトと酵母GAA1との間でキメラ分子を作成し、様々なGPIアンカー付加シグナルを認識できるかどうかを調べたところ、ヒトGAA1のC末側を酵母GAA1のC末部分に入れ換えると、酵母型の基質特異性を示したことから、GAA1のC末側にGPIアンカー付加シグナルの認識部位があること、すなわちGAA1は付加シグナルを認識していることを明らかにした。3、 GPI8はある種のシステインプロテアーゼと相同性を持つことから、このプロテアーゼファミリーに属する全てのメンバーにおいて保存され、活性に重要であると予想されるヒトGPI8の164番目のヒスチジンあるいは206番目のシステインをアラニンに変えた変異体を作成した。これらの変異体ではその活性は完全に消失したことから、GPI8はGPIアンカー付加シグナルの切断・除去に働いていることを明らかにした。

GPI is a complex of GAA1 and GPI 8, which is a complex of GPI 1 and GPI 8. GPI 8 is a complex of GPI 1 and GPI 8, which is a complex of GPI8 and GPI8. 1. GAA1 and GPI8 are introduced into CHO cells, anti-FLAG antibody is immunoprecipitated after solubilization, GPI8 is specific for co-precipitation, 2. The complex of GAA1 and GST is formed. 2. Yeast GAA1 and its intermediate molecular structure are composed of GPI and GAA1, and the substrate specificity of yeast GAA1 and its C-terminal structure is displayed. 3. GPI8 maintains the identity of each species, preserves all species and activities, and maintains the identity of each species. GPI8 has 164 species and 206 species. The activity of this variant is completely lost. GPI8 is cut off.

项目成果

Maeda,Y.et al.: "DPM2 regulates biosynthesis of dolichol phosphate-mannose in mammalian cells:correct subcellular localization and stabilization of DPM1,and binding of dolichol phosphate." EMBO J.17. 4920-4929 (1998)

Maeda,Y.et al.：“DPM2 调节哺乳动物细胞中多甘醇磷酸-甘露糖的生物合成：正确的亚细胞定位和 DPM1 的稳定，以及多甘醇磷酸的结合。”

Kinoshita,T.: "GPI-anchor synthesis in mammalian cells : genes,their products and a deficiency" J.Biochem.122. 251-257 (1997)

Kinoshita,T.：“哺乳动物细胞中的 GPI-锚定合成：基因、其产物和缺陷”J.Biochem.122。

Takahama,Y.et al.: "Functional competence of T cells in the absence of glycosylphosphatidylinositol-anchored proteins caused by T cell-specific disruption of the Pig-a gene." Eur.J.Immunol.28. 2159-2166 (1998)

Takahama,Y.et al.：“在缺乏糖基磷脂酰肌醇锚定蛋白的情况下，T 细胞的功能能力是由 T 细胞特异性破坏 Pig-a 基因引起的。”

Tomita,S.: "A homologue of Saccharomyces cerevisiae Dpm1p is not sufficient for synthesis of dolichol-phosphate-mannose in mammalian cells." J.Biol.Chem.273(in press). (1998)

Tomita,S.：“酿酒酵母 Dpm1p 的同源物不足以在哺乳动物细胞中合成多甘醇-磷酸-甘露糖。”

Nozaki, M., et al.: "Developmental abnormalities of glycosylphosphatidylinositol-anchor deficient embryos revealed by Cre/loxP system" Lab.Invest.(in press). (1999)

Nozaki, M., et al.：“Cre/loxP 系统揭示的糖基磷脂酰肌醇锚定缺陷胚胎的发育异常”Lab.Invest.（出版中）。