フラビウイルス脳炎の新側面-ウイルス感染に起因する精神機能異常の病態解明-

黄病毒脑炎的新面貌 - 阐明病毒感染引起的精神功能障碍的病理 -

• 批准号: 21658102
• 负责人: 木村 享史
• 金额: $ 2.05万
• 依托单位: Hokkaido University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Challenging Exploratory Research
• 财政年份: 2009
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2009 至 2010
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-21658102/
• 关键词: 日本脳炎ウイルス; ラット; 行動異; 行動異常

日本脳炎ウイルス(JEV)感染ラットの脳内では低レベルのウイルスゲノムRNA複製が持続している。この感染状態に類似したin vitroシステムを確立する目的で、以下の実験を行った。ラット神経細胞由来株化細胞として、温度感受性SV40T抗原で不死化されたCSM14.1を使用した。JEVの構造蛋白遺伝子を組み込んだ発現プラスミドを作製し、ウエストナイルウイルス(WNV)非構造蛋白遺伝子とEGFP発現カセットを有するWNVレプリコン(ペンシルベニア大学より分与)と共に293T細胞へ導入することにより、上清中に産生されるVLPを回収した。CSM14.1細胞にVLPを感染させた場合、31℃にて維持した細胞では13.6%がGFP陽性を示した。一方、37℃下で72時間培養し神経系分化マーカーが発現した細胞では、VLPの感染により51%がGFP陽性を示し、37℃下での培養によってVLP感染率が低下することが明らかとなった。また、37℃にて培養した細胞では、31℃で維持した細胞と比較して、エンドサイトーシスによるJEV particleの取り込み効率に差異があることが示唆された。従って、レプリコンRNAの導入には31℃にて維持した細胞を使用することが適切であることが確認された。JEV感染ラットの脳内ではセロトニン産生酵素であるトリプトファン水解酵素(TPH)の遺伝子発現が上昇している。F344ラットのTPHプロモーター配列は不明であるため、ゲノムウォーキングによりTPH1遺伝子上流(転写開始点を+1として-967から+15の領域)をクローニングし、pGL3ベクターに組み込んだ。これにより、Luciferase reporter assayを用いてVLP感染に伴うTPHプロモーター活性の変化を検索することが可能となった。以上に加え、JEV、WNV感染モデル動物の病理に関して報告を行った。

The Japanese virus infection virus (JEV) has been found to cause RNA replication. The infection status is similar to that of the vitro status. The temperature sensitive SV40 T antigen was used to immunize the neurons from CSM14.1. When JEV's structural protein gene was produced and its non-structural protein gene and EGFP were produced, the WNV protein gene (WNV) and EGFP were introduced into 293T cells together, and VLPs produced in the supernatant were recovered. 13.6% of CSM14.1 cells were GFP positive at 31℃. In addition, 51% of cells infected with VLP were GFP positive when cultured at 37℃ for 72 hours, and the infection rate of VLP was lower when cultured at 37℃. Cell culture at 37℃ and cell maintenance at 31℃ were compared to each other in terms of the percentage of JEV particles. The introduction of RNA into cells at 31℃ was confirmed to be appropriate. JEV infection in the body of the enzyme production, the enzyme production of the enzyme (TPH) increased. F344: TPH list is not clear, pGL3 list is not clear. The Luciferase Reporter assay is used in conjunction with the TPH assay. Report on Pathology of Animals Infected with JEV and WNV

项目成果

Flavivirus Encephalitis: Pathological Aspects of Mouse and Other Animal Models

• DOI: 10.1177/0300985810372507
• 发表时间: 2010-09-01
• 期刊: VETERINARY PATHOLOGY
• 影响因子: 2.4
• 作者: Kimura, T.;Sasaki, M.;Sawa, H.
• 通讯作者: Sawa, H.

ラット神経由来CSM14.1細胞株における日本脳炎ウイルス感受性

大鼠神经源性CSM14.1细胞系对日本脑炎病毒的敏感性

• 发表时间: 2009
• 作者: 奥村恵;ら
• 通讯作者: ら

Chondroitin sulfate-E induced enhancement of Japanese encephalitis virus infection

硫酸软骨素-E诱导乙型脑炎病毒感染增强

• 发表时间: 2010
• 作者: Kim;E.;et al.
• 通讯作者: et al.

Transcellular transport of West Nile virus-like particles across human endothelial cells depends on residues 156 and 159 of envelope protein.

• DOI: 10.1186/1471-2180-10-165
• 发表时间: 2010-06-08
• 期刊: BMC microbiology
• 影响因子: 4.2
• 作者: Hasebe R;Suzuki T;Makino Y;Igarashi M;Yamanouchi S;Maeda A;Horiuchi M;Sawa H;Kimura T
• 通讯作者: Kimura T