Elucidation of control mechanisms of viral gene expression in equine herpesvirus type 1-infected neurons

阐明马疱疹病毒 1 型感染神经元中病毒基因表达的控制机制

• 批准号: 22H02508
• 负责人: 木村 享史
• 金额: $ 8.82万
• 依托单位: Hokkaido University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research (B)
• 财政年份: 2022
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2022-04-01 至 2026-03-31
• 项目状态: 未结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-22H02508/
• 关键词: ヘルペスウイルス; ウマ; 神経細胞; 遺伝子発現調節

ウマヘルペスウイルス1型 (EHV-1) は神経細胞へ潜伏感染することが知られており、その成立にはウイルス遺伝子の発現抑制が関与すると推測されるが、詳細は不明である。本研究では、未分化状態においてEHV-1に高い感受性を示すが神経分化によって著しく感受性が低下するラット脳由来細胞株Rn33B-A68B2Mを潜伏感染モデルとして用い、神経分化状態と未分化状態におけるEHV-1増殖性の相違を規定する分子機構を解明し、神経細胞におけるEHV-1潜伏感染の成立機序について考察を行うことを目的とする。令和4年度は、EHV-1を感染させた未分化Rn33B-A68B2M細胞より全RNAを抽出し、EHV-1 IE 遺伝子のプロモーター領域より転写されるノンコーディングRNA（ncRNA）の塩基配列を決定した。EHV-1を感染させた未分化細胞と分化細胞におけるncRNAの発現をノーザンブロット法によって検索したところ、未分化細胞においてncRNAの発現が認められた。一方で、分化細胞におけるncRNAの発現レベルは非常に低いことが確認された。さらに未分化細胞におけるncRNAとIE遺伝子の発現を経時的に検索したところ、両遺伝子は共にEHV-1感染後14時間目より発現することがわかった。次に、ncRNAがIE遺伝子の転写効率に与える影響をルシフェラーゼレポーターアッセイにより評価したところ、ncRNAはORF12存在下でIE遺伝子の転写を促進することが明らかとなった。最後に、ncRNAのEHV-1感染における影響を検証する目的で、感染後24時間目におけるウイルス感染細胞数をncRNA導入細胞と非導入細胞で比較したところ、ncRNA導入により感染細胞数が増加することがわかった。

EHV-1 is a type of latent infection of neurons. It is suspected that EHV-1 is related to the inhibition of the development of EHV-1. In this study, the molecular mechanisms underlying the regulation of EHV-1 reproduction in the differentiated and undifferentiated states were elucidated, as well as the mechanisms underlying the latent infection in the cell line Rn33B-A68B2M. The mechanism of EHV-1 latent infection in neurons was investigated. In 2004, EHV-1 infected undifferentiated Rn33B-A68B2M cells were isolated from the whole RNA, and the RNA (ncRNA) gene sequence was determined. The expression of ncRNA in undifferentiated cells infected with EHV-1 and differentiated cells was detected by PCR. The expression of ncRNA in differentiated cells was very low and confirmed. The expression of ncRNA and IE gene in undifferentiated cells was detected 14 hours after infection. In addition, the ncRNA gene expression efficiency and the influence of the ncRNA gene expression efficiency on the development of the IE gene expression were evaluated. In the presence of the ncRNA ORF12, the development of the IE gene expression efficiency was promoted. Finally, the effect of ncRNA on EHV-1 infection was investigated. The number of infected cells increased 24 hours after infection compared with non-infected cells.

项目成果

The expression of histone lysine demethylase 2B in canine hemangiosarcoma is associated with disease progression

犬血管肉瘤中组蛋白赖氨酸去甲基化酶2B的表达与疾病进展相关

• DOI: 10.1111/vco.12796
• 发表时间: 2021
• 期刊: Veterinary and Comparative Oncology
• 影响因子: 2.1
• 作者: Gulay Kevin Christian M.;Aoshima Keisuke;Kim Sangho;Kitaguchi Ryusei;Kobayashi Atsushi;Kimura Takashi
• 通讯作者: Kimura Takashi

Manipulating histone acetylation leads to antitumor effects in hemangiosarcoma cells

操纵组蛋白乙酰化可导致血管肉瘤细胞的抗肿瘤作用

• DOI: 10.1111/vco.12840
• 发表时间: 2022
• 期刊: Veterinary and Comparative Oncology
• 影响因子: 2.1
• 作者: Suzuki Tamami;Aoshima Keisuke;Yamazaki Jumpei;Kobayashi Atsushi;Kimura Takashi
• 通讯作者: Kimura Takashi

Virological, pathological, and glycovirological investigations of an Ezo red fox and a tanuki naturally infected with H5N1 high pathogenicity avian influenza viruses in Hokkaido, Japan

• DOI: 10.1016/j.virol.2022.11.008
• 发表时间: 2022-12-01
• 期刊: VIROLOGY
• 影响因子: 3.7
• 作者: Hiono, Takahiro;Kobayashi, Daiki;Sakoda, Yoshihiro
• 通讯作者: Sakoda, Yoshihiro