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PAC発現トランスジェニックマウスの作成と解析

表达 PAC 的转基因小鼠的创建和分析

基本信息

批准号：
21659044
负责人：
中田隆夫
金额：
$ 1.92万
依托单位：
Tokyo Medical and Dental University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Challenging Exploratory Research
财政年份：
2009
资助国家：
日本
起止时间：
2009 至 2010
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-21659044/
关键词：
光遺伝学 adenylylcyclase PAC 軸索投射 cAMP transgenic mouse 神経回路網

项目摘要

これまでの10年は、GFP technologyの発達によって、光を使って生きた細胞内の分子や活性を観察できるようになった。次のステップは、光を使って生きた細胞の機能を外部から操作することで、細胞内のシグナルシステムのより深い理解を目指すことであると考えている(Gorostiza and Isacoff, Science 322:395-399,2008)。本研究は,ミドリムシで機能している光感受性蛋白を動物に遺伝子導入することによって、動物個体のシグナル伝達を光で操作する試みが新しい点である。具体的には、光感受性adenylyl cyclaseのトランスジェニックマウスを作成し、光をあてることで細胞内のcAMP濃度を操作できるようにする。目的の達成のため、当初はミドリムシphoto-activated adenylyl cyclase(PAC)を用いる予定であった。しかし、2009年5月に細胞内cAMPを光制御できる全く新しい,有力な分子が発表された(Nature.2009,458(7241):1025-9)。そのため、ミドリムシPACと新しい分子のどちらが最も適しているかをマウスを作成する前にin vitroで検討する必要が生じた。このため、マウス作成が当初予定より遅れ、研究費の一部繰越が必要となった(繰越の報告書参照)。検討の結果当初計画どおり、ミドリムシPACの方が優れていた。更にPACに膜移行シグナルを付けるか、抗体による認識tagを付けるか、蛍光蛋白との共発現についてもin vitroで検討した。この結果を踏まえ一部の神経でPACとRFPを共発現するトランスジェニックマウスを作製した。トランスジェニックマウスはほぼ正常に生育した。またPAC発現細胞の軸索も予想通り投射していた。以上、本研究の結果、cAMPの光制御と神経回路網の操作の研究の良いモデルマウスの作製に成功した。

In the past 10 years, GFP technology has reached the level of fluorescence, and light causes the activity of intracellular molecules to be detected. In the second half of the year, light makes it possible for the cell to operate externally, and to make sure that the Gorostiza and Isacoff, Science 322, 322, 395-399, 2008). In this study, the photosensory protein enzyme was used in this study. In this study, the photosensory protein enzyme was transferred into the system, and the system was tested in this study. Specific photosensitivity, adenylyl cyclase sensitivity, photosensitivity, photosensitivity, phot The purpose of this article is to determine whether the photo-activated adenylyl cyclase (PAC) is intended to be predetermined. In May 2009, the intracellular cAMP photoluminescence system was used to measure the molecular weight of the whole cell (Nature.2009458 (7241): 1025-9). This is the most important thing in the world. I need to know that it is necessary to give birth to a person who needs to be born in the first place. This is the most important thing in the world. This is the most important thing in PAC. The more necessary it is to study a movie, the more necessary it is to make a reference to the report. The results showed that the original plan was to improve the quality of the PAC. In addition, PAC membrane transfer, antibody detection, tag transfer and photolabinism were detected. In vitro was detected. Results the results show that a PAC RFP system is designed to improve the quality of the system. Please tell me that you have a normal birth. Now that you want to PAC, you want to project your brain. The above, the results of this study, the cAMP optical system and the operation of the network operation system have been successfully tested.