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ヒト小児眼球由来細胞を用いた網膜の形成・再生に関する研究

利用人儿科眼球来源细胞进行视网膜形成和再生的研究

基本信息

批准号：
21659403
负责人：
東範行
金额：
$ 1.98万
依托单位：
National Research Institute for Child Health and Development
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Challenging Exploratory Research
财政年份：
2009
资助国家：
日本
起止时间：
2009 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

小児網膜芽細胞腫の患者から摘出された眼球から、分化能を有する神経前駆細胞を含む細胞集団を単離後、浮遊状態でこれら多分化能を有する細胞を増やし(neurosphere法)、その後、これまでに蓄積したニワトリやマウス研究からの知見や技術を応用して、ヒト網膜を構成する複数種類の神経細胞へ分化誘導することを目的し、以下の実験を行った。本研究の特色は、モデル生物を用いた研究成果に基盤をおきながら、臨床から得られるヒト組織を用いて研究を展開する点にある。1)neurosphere法でヒト細胞が増殖するか否かの検討:ヒト眼球由来虹彩細胞、網膜グリア細胞、毛様体上皮細胞などは、neurosphere法で数ヶ月間、培養を維持することが可能であった。Sphereの免疫染色では、神経幹細胞マーカーの発現がみられた。2)Pax6遺伝子による効果:ヒト眼球由来虹彩細胞にPax6遺伝子を導入すると、神経系マーカーの発現が上昇し(RT-PCR),さらに継代することによって、自己複製能と神経分化能を持った神経前駆細胞様の細胞が得られた。また、Pax6遺伝子の導入によって視細胞マーカーの発現上昇を促進した。3)bFGFなど液性因子や転写因子の遺伝子導入の効果:ヒト眼球由来の種々の細胞をhanging drop法によってsphereを作成後にB27とbFGFを含む培養液で数週間培養することによって、神経誘導が可能であった。また、虹彩細胞、網膜グリア細胞、毛様体上皮細胞から網膜視細胞が分化誘導されたが、bFGFなどの液性因子に加え、複数の網膜関連遺伝子の導入が必要であることが示唆された。そこで、網膜分化を決定する転写因子遺伝子群に属する多数の遺伝子を作成、エントリーベクターに組み込み、ウィルスベクターを作成。これらをヒト小児眼球由来細胞に導入し、目的とする網膜細胞を作成した(direct reprogramming)。4)分化誘導された網膜細胞の機能評価をカルシウムイメージングによって行った。以上から、ヒト網膜神経細胞への分化誘導に必要な因子は、モデル生物を用いた研究成果から推測されるものとほぼ一致することがわかった。

In patients with small membranous sprouts, the eyeballs were removed, the differentiation was performed, and the cells were collected before and after the differentiation. After the cells were collected, the floating cells were more differentiated (neurosphere method), and after that, the cells were stored and used in the study. The network network will be divided into multiple data cells to guide the target network, and the following data will be used. In this study, the characteristics of the study, the results of the biological research, the results of the research, the results of the research, the characteristics of this study, the results of the research, the results of the research and the results of the research. 1) neurosphere method is used to determine whether or not iridoid cells, network cells, hair epithelium cells, neurosphere method, culture and maintenance of eyeballs may be affected. Sphere immunoreactivity was detected by immunostaining, and the cells were detected by immunostaining. 2) the results of Pax6 clones show that the eyeballs come from the rainbow, the Pax6 clones, the goddesses, the goddesses, the clones, the divinities, the cells, the cells. Now that you can promote the development of your computer, you will need to pay more attention to the development of your Pax6. 3) the bFGF liquid factor, the writing factor, the writing factor, the source of the eyeball, the origin of the eyeball, the hanging drop method, the sphere, the B27, the bFGF, the culture, the temperature, the temperature and the temperature. Cell cycle, iridescent cell, network cell cell, hairy body epithelial cell network differentiation leader cell, bFGF cell liquid factor plus, complex network filter cell entry into the necessary cell cycle is an instigation factor. Network differentiation determines that the subgroup of the write factor is made by most of the users, and that the subgroup is made by the majority of the users. Because of the origin of the small eyeball, the origin of the small eyeball and the origin of the small eyeball, the origin of the small eyeball and the origin of the small eyeball. The purpose of this study is to make a direct reprogramming. 4) differentiate and direct the network cell computer to make sure that the network network is in good condition. The above research results have been used to guide the necessary factors in the differentiation of cellular differentiation in the network, and the results of the research have been used to make sure that the results are consistent.