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ヒト小児眼球由来細胞を用いた網膜の形成・再生に関する研究

利用人儿科眼球来源细胞进行视网膜形成和再生的研究

基本信息

批准号：
20659274
负责人：
東範行
金额：
$ 2.05万
依托单位：
National Research Institute for Child Health and Development
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Exploratory Research
财政年份：
2008
资助国家：
日本
起止时间：
2008 至 2009
项目状态：
已结题

项目摘要

小児網膜芽細胞腫の患者から摘出された眼球から、分化能を有する神経前駆細胞を含む細胞集団を単離後、浮遊状態でこれら多分化能を有する細胞を増やし(neurosphere法)、その後、これまでに蓄積したニワトリやマウス研究からの知見や技術を応用して、ヒト網膜を構成する複数種類の神経細胞へ分化誘導することを目的し、以下の実験を行った。本研究の特色は、モデル生物を用いた研究成果に基盤をおきながら、臨床から得られるヒト組織を用いて研究を展開する点にある。※ヒト小児患者由来の細胞を用いた網膜神経細胞への分化誘導系の確立1)neurosphere法でヒト細胞が増殖するか否かの検討:ヒト眼球由来虹彩細胞、網膜グリア細胞、毛様体上皮細胞などは、neurosphere法で数ヶ月間、培養を維持することが可能であった。Sphereの免疫染色では、神経幹細胞マーカーの発現がみられた。2)Pax6遺伝子による効果:ヒト眼球由来虹彩細胞にPax6遺伝子を導入すると、神経系マーカーの発現が上昇し(RT-PCR)、さらに継代することによって、自己複製能と神経分化能を持った神経前駆細胞様の細胞が得られた。また、Pax6遺伝子の導入によって視細胞マーカーの発現上昇を促進した。3)bFGFなど分泌因子の効果:ヒト眼球由来の種々の細胞をhanging drop法によってsphereを作成後にB27とbFGFを含む培養液で数週間培養することによって、神経誘導が可能であった。また、虹彩細胞、網膜グリア細胞、毛様体上皮細胞から網膜視細胞が分化誘導されたが、bFGFなどの液性因子に加え、複数の網膜関連遺伝子の導入が必要であることが示唆された。以上から、ヒト網膜神経細胞への分化誘導に必要な因子は、モデル生物を用いた研究成果から推測されるものとほぼ一致することがわかった。

Patients with omental blastocytoma have to remove the eyeball, differentiate, and grow cells that contain neuronal cells, cell aggregates, and cells that have pluripotent differentiation.(Neurosphere method), after the accumulation, the study of knowledge and technology, the formation of a plurality of types of neural cell differentiation, the purpose of the following implementation The characteristics of this study are: basic research results, clinical results, tissue research results Establishment of differentiation induction system for retinal neurons derived from small children 1) Discussion on proliferation of retinal neurons by neurosphere method 1) Establishment of differentiation induction system for retinal neurons derived from small children by neurosphere method 2) Establishment of differentiation induction system for retinal neurons derived from small children by neurosphere method 3) Establishment of differentiation induction system for retinal neurons derived from small children by neurosphere method 4) Establishment of differentiation induction system for retinal neurons derived from small children by neurosphere method 5) Establishment of differentiation induction system for retinal neurons derived from small children by neurosphere method 6) Establishment of differentiation induction system for retinal neurons derived from small children by neurosphere method 7) Establishment of differentiation induction system for retinal neurons derived from small children by neurosphere method 8) Establishment of differentiation induction system for retinal neurons derived from small children by neurosphere method 5) Establishment of differentiation induction system 6) Establishment of differentiation induction system 7) Establishment of differentiation system for retinal neurons derived from small children by neurosphere method 8) Establishment of differentiation system 7) Establishment system 8) Establishment system 9) Establishment system 9 Sphere immunostaining, neuronal stem cell development 2)Pax6 gene expression results: The expression of Pax6 gene in human iris cells was increased by RT-PCR, and the expression of Pax6 gene in human iris cells was increased by RT-PCR, and the expression of Pax 6 gene in human iris cells was increased by RT-PCR. The introduction of Pax6 gene promotes the development of visual cells. 3)bFGF secretion factor effect: eye origin cell hanging drop method after the sphere is prepared, B27 and bFGF containing culture medium for several weeks, brain induction may be possible. It is necessary to induce the differentiation of retinal cells, iridescent cells, retinal cells, hair epithelial cells and retinal cells, to increase the concentration of bFGF, and to introduce a plurality of retina-related genes. The results of the study on the necessary factors for the induction of retinal neuronal differentiation indicate that the differentiation of retinal neurons is consistent with the differentiation of retinal neurons.

项目成果

期刊论文数量（14）

专著数量（0）

科研奖励数量（0）

会议论文数量（0）

专利数量（0）

SOX10 mutation in Warrdenburg syndrome type II

II 型 Warrdenburg 综合征 SOX10 突变

DOI：
发表时间：
2008
期刊：
Am J Med Genet 146A
影响因子：
0
作者：
Iso M;Fukami M;Horikawa R;Azuma N;Kawashiro N;Ogata T
通讯作者：
Ogata T

Aggressive posterior retinopathy of prematurity に対する早期硝子体手術後の再増殖

早产儿侵袭性后部视网膜病变早期玻璃体切除术后的再生

DOI：
发表时间：
2008
期刊：
影响因子：
0
作者：
横井匡;横井多恵;小林百合;平岡美依奈;仁科幸子;東範行
通讯作者：
東範行

Human sclera maintains common characteristics with cartilage throughout evolution.

DOI：
10.1371/journal.pone.0003709
发表时间：
2008
期刊：
PLOS ONE
影响因子：
3.7
作者：
Seko, Yuko;Azuma, Noriyuki;Takahashi, Yoriko;Makino, Hatsune;Morito, Toshiyuki;Muneta, Takeshi;Matsumoto, Kenji;Saito, Hirohisa;Sekiya, Ichiro;Umezawa, Akihiro
通讯作者：
Umezawa, Akihiro

Hypovascular glial overgrowth from the optic nerve head in fetuses of 16 weeks gestation.

妊娠 16 周胎儿视神经乳头血管不足的胶质细胞过度生长。