权益分类	功能权益	普通用户	{{item.name}}会员
{{category.name}}	{{benefitItem.name}}

非接着培養による細胞老化の制御

非贴壁培养控制细胞衰老

基本信息

批准号：
21659412
负责人：
貴志和生
金额：
$ 1.92万
依托单位：
Keio University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Challenging Exploratory Research
财政年份：
2009
资助国家：
日本
起止时间：
2009 至 2010
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-21659412/
关键词：
老化再生医療非接着培養皮膚再生付属器細胞

项目摘要

真皮の幹細胞と考えられているSkin derived precursors(Skps)は、細胞増殖因子を添加し、無血清培地にすることで接着せず細胞魚集塊を形成することで得られる。本研究では、「幹細胞」だからコロニーを形成し、分裂、増殖するのか、凝集するから幹細胞様の不死化した性質を獲得するのかという点の検証を行った。老化し分裂回数が低下した線維芽細胞を非接着性培養皿で培養し、細胞凝集塊を形成させ、さまざまな培養期間の後に、再び酵素処理により単一細胞に分離し、細胞増殖能が増加することを確認した。驚くべきことに4ケ月間凝集塊を形成した状態でも細胞塊は生存し続けた。接着培養に戻し、再び増殖させ、その後の分裂回数を調べた。増殖能が低下した後に再び非接着性培養皿に戻し、細胞凝集塊を形成させ、その後再び接着培養に戻すという操作を繰り返し、どの程度まで分裂回数が復活するかを調べたところ、経継代的に増殖能は増加していった。Genechipによる解析で、細胞凝集塊を形成した細胞で発現が増強している遺伝子をreal time PCRで確認を試みたが、ほとんどの遺伝子は、凝集塊で働いていない状態であった。一方で、いくつかの未分化マーカーとされている遺伝子は発現の上昇がみられた。siRNAによる遺伝子ノックダウンは、本研究では奏功しなかったが、今後、発現の上昇がみられた遺伝子改変細胞を用いることで、老化のメカニズムにさらに迫ることができるものと考えられた。

Dermal stem cells are cultured in the presence of Skin derived precursors(Skps), cell growth factors, and serum-free cultures. This study was conducted to demonstrate the formation, division, proliferation, aggregation, and immortality of stem cells. It was confirmed that the number of cell divisions decreased during aging, and that cell aggregates were formed during non-adherent culture, and that cell separation and cell proliferation increased during subsequent enzyme treatment. The cell mass is in a state of survival. Then culture, reproduction, and the number of subsequent cleavage cycles were adjusted. Growth energy decreased after incubation in non-adherent culture dishes, cell aggregate formation, post-incubation and subsequent incubation, and increased after incubation. Genechip analysis, cell agglutination formation, cell development, enhancement, gene detection, real time PCR confirmation, cell agglutination, cell aggregation, cell aggregation, cell aggregation A side, middle This study was conducted to investigate the effects of siRNA on the development of cells in the future.