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スキッドマウス皮膚再構築モデルを用いた皮溝・皮丘形成メカニズムの探求

利用滑鼠皮肤重建模型探讨皮沟和皮丘形成机制

基本信息

批准号：
16659488
负责人：
貴志和生
金额：
$ 2.05万
依托单位：
Keio University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Exploratory Research
财政年份：
2004
资助国家：
日本
起止时间：
2004 至 2005
项目状态：
已结题

项目摘要

免疫不全マウスC.B-17/Icr-scidJcl、オス8週から12週の背部に直径8皿の皮膚全層欠損層を作成し、ここにC57bl/6Jマウスの胎生17日の胎仔のそれぞれ表皮と真皮をディスパーゼで分離し、トリプシン処理でそれぞれ細胞を浮遊させた後、1x10^7個ずつ背部皮膚全層欠損層に表皮細胞と真皮細胞を混合移植し、テフロンキャップで被服した。4週後に皮膚表面をダーマスコープで観察するとともに、組織像で皮膚の再生の有無を観察した。発生過程の胎仔正常皮膚および混合移植皮膚を4%パラフォルムアルデヒドで固定し、これらの物質につき、免疫染色、in situ hybridizationを用いて発現の差異を解析した。胎生17日の表皮ならびに真皮細胞を組み合わせたモデルで、siRNAが効率的に導入できるかを、真皮細胞側にリポゾームを用いてlamin A/Cを導入した後に、表皮細胞、真皮細胞の混合移植を行った。またGFP発現ベクターをリポフェクション法により真皮細胞に導入し、遺伝子導入の効率を観察した。また真皮細胞にエラスチン、fiberillinなど、これまでに皺の形成に関係していると考えられている物質につき、やはりsiRNAで発現をブロックし、混合移植を行い皮膚の性状を観察した。混合移植後28日目に再構築された皮膚表面の形状を、ダーマスコープで観察し、遺伝子操作を加えていない皮膚再構築モデルの皮溝、皮丘の形成状況とを比較した。

Immunodeficiency virus C.B-17/Icr-scidJcl, 8 weeks old, 12 weeks old, 8 mm in diameter, full thickness skin defect layer, C57bl/6J, 17 days old fetus, epidermis and dermis, separation, treatment, suspension, 1x10^7 cells, full thickness skin defect layer, mixed transplantation of epidermis and dermis cells The first time I saw him was when I was a kid. After 4 weeks, the skin surface was observed. Analysis of differences between fetal normal skin and mixed graft skin during development, including fixation, immunostaining, and in situ hybridization After the introduction of lamin A/C, epidermal cells and dermal cells were mixed and transplanted. The GFP gene expression system was developed to investigate the efficiency of gene transfer into dermal cells. To investigate the relationship between dermal cells, fibroin, and wrinkle formation, and to investigate the relationship between dermal cells, fibroin, and siRNAs, and to investigate the characteristics of skin during mixed transplantation. 28 days after the hybrid transplantation, the reconstruction of the skin surface was observed, and the skin groove and skin mound formation were compared.