Creation of improved galactokinases for natural product glycorandomization

创建用于天然产物糖随机化的改良半乳激酶

• 批准号: 5396818
• 负责人: Professor Dr. Dirk Hoffmeister
• 金额: --
• 依托单位: Lehrstuhl für Pharmazeutische Mikrobiologie
• 依托单位国家: 德国
• 项目类别: Research Fellowships
• 财政年份: 2002
• 资助国家: 德国
• 起止时间: 2001-12-31 至 2003-12-31
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://gepris.dfg.de/gepris/projekt/5396818?language=en
• 关键词: Creation; improved; galactokinases; natural; product

Bei vielen Medikamenten, vor allem bei solchen gegen Infektionskrankheiten und Krebs, spielen spezielle Zucker als Bestandteil des Wirkstoffs häufig eine entscheidende Rolle für die pharmakologischen Eigenschaften. Zur Entwicklung verbesserter Medikamente ist die Verfügbarkeit dieser Zucker dringend erforderlich, jedoch sind diese mit herkömmlichen chemischen Methoden nur unzureichend herstellbar. Eine erfolgversprechende Herangehensweise, die Glycorandomisierung, ist nun vorgeschlagen worden, um eine Vielfalt unterschiedlicher Zucker in einem unspezifischen, zweistufigen enzymatischen Prozeß in die benötigte aktive Form zu überführen. Im ersten Schritt wird eine grosse Anzahl verschiedener Zucker phosphoryliert, im zweiten Schritt erfolgt die Umsetzung zum benötigten Produkt, dem Nucleotid-Zucker. Letztere fliessen dann in die weitere Entwicklung verbesserter Medikamente ein.Prinzipielles Ziel des beantragten Projektes ist die Bereitstellung des für den ersten Schritt benötigten Enzyms (einer sogenannten Galactokinase) mit molekularbiologischen Methoden: Eine bislang nicht einsetzbare, weil hochselektive Kinase soll durch eine in vitro Evolution mit zufälligen genetischen Veränderungen derart modifiziert werden, daß sie unselektiv gegenüber den ihr angebotenen Zuckern wird. Diese neu generierte Kinase liefert dann Zwischenstufen (Zuckerphosphate), die von bereits optimierten Enzymen des zweiten Schrittes zu den benötigten Produkten (Nucleotid-Zucker) umgesetzt werden. Somit hängt der Erfolg der Gesamtstrategie von der Flexibilisierung des ersten Schrittes ab.Das beantragte Projekt besteht aus drei Abschnitten. Ziel des ersten Abschnittes ist die zufällige Erzeugung vieler Enzymvarianten d.h. Herstellung einer Enzymbibliothek. Der zweite Abschnitt hat zum Ziel, diejenigen Bibliotheksmitglieder zu detektieren, die den herkömmlichen Enzymen überlegen, also unspezifischer sind. Der dritte Projektabschnitt beinhaltet die Reinigung und biochemische Charakterisierung der verbesserten Enzyme.

Bei vielen Medikamenten，vor allem bei solchen gegen Infektionskrankheiten und Krebs，spielen spezielle Zucker als Bestandteil des Wirkstoffs häufig eine entscheidende Rolle für die pharmakologischen Eigenschaften. Zur Entwicklung verbesserter Medikamente ist die Verfügbarkeit dieser Zucker dringend erforderlich，jedh sind diese mit herkömmlichen chemischen Methoden努尔unzureichend herstellbar.一种非特异性的、双酶促的蛋白质酶促反应，即糖代谢，是一种独特的沃登，是一种非特异性的、双酶促的蛋白质酶促反应。首先，Schritt会用一种大的Anzahl来验证Zucker磷酸盐，然后再用Schritt的方法来生产更好的产品，即核苷酸Zucker。让我们一起来了解这一新的医学发展趋势。本研究的主要目的是用分子生物学方法研究第一种有益的半乳糖激酶（一种半乳糖激酶）：一种非选择性激酶通过体外遗传学方法进行进化，这种方法通过韦尔登进行修饰，避免不选择性地产生Zuckwird。这种新产生的激酶主要来自Zwischenstufen（Zuckerphosphate），它是由两种优化的酶组成的一种韦尔登酶。Somit hängt der Erfolg der Gesamtstrategie von der rebilisierung des ersten Schrittes ab.Das beantragte Projekt besteht aus drei Abschnitten. Ziel des ersten Abschnittes ist die zufälige Erzeugung vieler Enzymvarianten d.h.我们去图书馆。第二次Abschnitt是在Ziel，diejenigen Bibliotheksmitlieder zu detektieren，die den herkömmlichen Enzymen uberlegen，also unspecifischer sind.本论文主要研究酶的活性和生化特性。