TIMを介したアポトーシス細胞除去が気管支喘息の病態において果たす役割の検討

本研究の目的は、気管支喘息の病態におけるTIMファミリー分子の役割をアポトーシス細胞除去の観点から検討することにある。TIMファミリー分子がアポトーシス細胞除去を介して気道の恒常性を維持しており、その機能不全が気管支喘息発症の要因となりうるという仮説を検証する。また、TIMファミリー分子の発現や機能を高めるような介入が、気管支喘息治療に応用できるか検討する。平成22年度は、患者から安全に検体を採取する方法、および測定系の確立に重点をおき、研究を進めた。ヒトの気道細胞を採取する方法としては、気管支鏡を用いた気管支肺胞洗浄や直視下気管支粘膜生検が効率的である。しかしながら、気管支喘息患者においては発作を誘発する危険があり、また治療方針の決定において必須ではないため、実際の臨床で施行されることはない。したがって、3-5%食塩水のネブライザー吸入で喀痰を誘発する事により、気道細胞を収集した。誘発喀痰の手法は気管支喘息患者に対しても発作を誘発することなく、安全に施行することができた。TIMファミリー分子(ヒトではTIM-1, 3, 4)の発現解析には、フローサイトメトリー、免疫染色、RT-PCR法を試みたが、集められる細胞数に限りがあるため、フローサイトメトリー法では十分な解析が困難であった。またRT-PCRは細胞種ごとの発現の評価ができないため、免疫染色での解析を中心に行っていくこととし、今後症例を集積していく予定である。収集した喀痰の液性成分における可溶性TIM分子の測定を行うため、リコンビナントタンパクをコントロールとして、ELISAシステムの確立を行った。こちらも症例を集積し、患者背景(重症度、病型、ステロイドへの反応性なと)と合わせて解析していく予定である。

本研究の目的は、気管支喘息の病態におけるTIMファミリー分子の役割をアポトーシス細胞除去の観点から検討することにある。TIMファミリー分子がアポトーシス細胞除去を介して気道の恒常性を維持しており、その機能不全が気管支喘息発症の要因となりうるという仮説を検証する。また、TIMファミリー分子の発現や機能を高めるような介入が、気管支喘息治療に応用できるか検討する。平成22年度は、患者から安全に検体を採取する方法、および測定系の確立に重点をおき、研究を進めた。ヒトの気道細胞を採取する方法としては、気管支鏡を用いた気管支肺胞洗浄や直視下気管支粘膜生検が効率的である。しかしながら、気管支喘息患者においては発作を誘発する危険があり、また治療方針の決定において必須ではないため、実際の臨床で施行されることはない。したがって、3-5%食塩水のネブライザー吸入で喀痰を誘発する事により、気道細胞を収集した。誘発喀痰の手法は気管支喘息患者に対しても発作を誘発することなく、安全に施行することができた。TIMファミリー分子(ヒトではTIM-1, 3, 4)の発現解析には、フローサイトメトリー、免疫染色、RT-PCR法を試みたが、集められる細胞数に限りがあるため、フローサイトメトリー法では十分な解析が困難であった。またRT-PCRは細胞種ごとの発現の評価ができないため、免疫染色での解析を中心に行っていくこととし、今後症例を集積していく予定である。収集した喀痰の液性成分における可溶性TIM分子の測定を行うため、リコンビナントタンパクをコントロールとして、ELISAシステムの確立を行った。こちらも症例を集積し、患者背景(重症度、病型、ステロイドへの反応性なと)と合わせて解析していく予定である。