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多様な微小管制御の構造生物学的アプローチ

多种微管调节的结构生物学方法

基本信息

批准号：
11J40042
负责人：
三島綾子 (前崎綾子)
金额：
$ 1.54万
依托单位：
Nara Institute of Science and Technology
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for JSPS Fellows
财政年份：
2011
资助国家：
日本
起止时间：
2011 至 2013
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-11J40042/
关键词：
微小管制御蛋白質 NMR αβ-tubulin 複合体動的構造解析チューブリン TTL tubulin

项目摘要

1, TTLの立体構造解析昨年度までに、TTLの立体構造解析に向けて、TTLのコンストラクトの最適化を行い、NMR測定で良好な結果が得られるコンストラクトを作成した。このコンストラクトを用いて、発現、精製を行うことにより、NMR測定サンプルを得ることができた。このサンプルを用いてTTLの活性に必要なマグネシウム、基質であるチロシンとの相互作用が検出できている。また精製サンプルを用いて、現在、NMRによる動的な構造解析を進めている。2, Tubulinの発現系の構築α-tubulinとβ-tubulimを共発現させることにより、大腸菌でのTubulinの発現を試みた。発現過程でのtubulinのアセチル化や発現条件、大腸菌の破砕条件などを検討して、高純度、高収量でtubulinを精製できるよう改善を行っている。3, タンパク質の発現条件の改善カイコ(幼虫)によるタンパク質の大量生産は、細胞培養、ウィルス作成、タイター測定などの必要がなく、発現系の構築から組み換えタンパク質の抽出まで二週間程度で完了することが利点である。この、カイコを用いたタンパク質の発現系を用いて、大腸菌では発現が困難な活性型蛋白質を高発現での発現、精製に成功した。この結果については、現在論文作成中である。4, SAHRP! SMRT複合体の立体構造解析昨年度までに、転写抑制共役因子SHARP/SMRT複合体の形成がcasein kinase2によるリン酸化によって制御されることを発見し、SAHRP/SMRT複合体の立体構造を決定した。これらの結果をまとめ、論文を発表した。

1, TTL's three-dimensional structure analysis last year's までに, TTL's three-dimensional structure analysis に向けて, TTL's のコンストThe optimized results of the Rakuten Optimization and the NMR measurement are good and the results of the Optimization are obtained. The このコンストラクトを was measured using いて, 発appear, refined を行うことにより, and NMR to obtain ることができた.このサンプルを Use いてTTL のActivity になマグネシウム, matrix であるチロシンとのInteraction が検出できている. The structure analysis of the また refined サンプルを using いて, now, NMR による is carried out. 2. Tubulinの発appears to build α-tubulin and β-tubulim to develop together. The conditions for the emergence process of tubulin and the conditions for the destruction of coliform bacteria検恗て、High purity and high yield でtubulin をRefined できるようImprove を行っている. 3, The conditions for improvement of タンパクの発 present conditions カイコ (larvae) によるタンパクquality のmass production は, cell culture, ウィルス production, タイターMeasure the essentials of the basics, the construction of the current system, the group, the quality, and the quality of the extraction, and the level of the two weeks is completed.この, カイコを用いたタンパクquality の発appears the system いて, coliform では発appears the difficulty なactive protein をhigh 発appears, the refined にsuccess した. The result of this is the result, and the paper is currently being written. 4. SAHRP! Analysis of the three-dimensional structure of the SMRT complex last year, and the casein of the formation of the SHARP/SMRT complex that inhibits the co-acting factor The acidification of kinase2 is controlled by acidification, and the three-dimensional structure of the SAHRP/SMRT complex is determined.これらのRESULTSをまとめ、paperを発 tableした.