細胞骨格、接着を制御するRhoキナーゼの構造生物学的研究

控制细胞骨架和粘附的 Rho 激酶的结构生物学研究

• 批准号: 03J01685
• 负责人: 三島 綾子 (前崎 綾子)
• 金额: $ 2.11万
• 依托单位: Nara Institute of Science and Technology
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for JSPS Fellows
• 财政年份: 2003
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2003 至 2005
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-03J01685/
• 关键词: 低分子量G蛋白質; Rhoファミリー; X線結晶構造解析; 微小管結合蛋白質; Rhoキナーゼ; 標的蛋白質

低分子量G蛋白質RhoAの標的蛋白質であるRhoキナーゼについて、Auto inhibitionのメカニズムを複合体の構造解析から解明することを目的として、キナーゼドメイン、コイルドコイル/RhoA結合ドメイン、さらにPH様モチーフの3種類についてそれぞれ単独での精製を行い、複合体としての結晶化条件のスクリーニングを行った。低分子量G蛋白質Rhoファミリーの他の蛋白質であるCdc42やRacの下流において、細胞骨格を制御している蛋白質であるCLIP-170のN末端領域にあるCAP-Glyドメインについての研究を行った。本研究課題一年目において、2番目のCAP-Glyドメインの構造解析を完了しているが、今年度は、一番目のCAP-Glyドメインの構造解析を完了させた。さらに、これらのCAP-Glyドメインは微小管や他の微小管のプラス端結合蛋白質であるEB1と相互作用することが報告されているため、これらの蛋白質との相互作用についても研究を進めた。既に得られているCAP-Glyドメインの構造をもとにして、微小管やEB1との相互作用領域を予測し、予測された相互作用領域に変異を入れ、相互作用実験を行うことにより、それらの領域の重要性を明らかにした。相互作用の研究においては、CLIP-170のCAP-Glyドメインと微小管やEB1との複合体での結晶化条件のスクリーニングも行った。この他、現在までに得られた成果について、日本蛋白質科学会及び日本分子生物学会においてポスター発表を行った。

The protein of low molecular weight G protein (RhoA protein) was cloned into Rho and Auto inhibition proteins. The complex was constructed and analyzed. The purpose of this study was to identify the target gene of G protein. The purpose of this study was to identify the target gene of G protein. The purpose of this study was to analyze the combination of RhoA and RhoA. The conditions for the crystallization of the complex are different from each other. Low molecular weight G protein, Rho protein, Rac protein, low molecular weight protein, CAP-Gly protein, low molecular weight protein, CLIP-170 protein, low molecular weight G protein, low molecular weight protein, protein and protein. The purpose of this study is to complete the analysis of one-year and two-year CAP-Gly programs, and the analysis of this year, this year, and the CAP-Gly of this year. The microtubule, CAP-Gly, EB1 interaction, protein interaction. In this way, we can know that the field of interaction, the importance of the field of interaction. The interaction between microtubules and microtubules was studied by CLIP-170, CAP-Gly, EB1, and the crystallization conditions of the complex were studied. He has obtained a lot of results, the Japanese Society of protein Science and the Society of Molecular Biology of Japan.