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微小管ダイナミックスを制御する蛋白質複合体の構造学的研究

控制微管动力学的蛋白质复合物的结构研究

基本信息

批准号：
07J45122
负责人：
三島綾子 (前崎綾子)
金额：
$ 1.39万
依托单位：
Nara Institute of Science and Technology
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for JSPS Fellows
财政年份：
2007
资助国家：
日本
起止时间：
2007 至 2010
项目状态：
已结题

项目摘要

CLIP-170の二つのCAP-Glyドメインによる微小管認識機構の解明及びCLIP-170の自己抑制機構の解明についての研究を行った。NMRを用いた構造解析に向けて、昨年度に引き続きサンプル調製およびスペクトルの測定を行った。特にCAP-Gly1,2とα,β-tubulinとの相互作用を検討する研究では、分子量が大きなものであるため、100%重水での培養及びサンプル調製を行った。さらに、大腸菌を用いた蛋白質発現及び精製が困難であると考えたサンプルについては、昆虫細胞Sf9を用いた培養を行った。今年度の研究については、NMRを用いた研究が主だったため、共同研究先の首都大学東京の有機構造生物化学研究室において行った。Sf9細胞の培養については、首都大学東京において、培養の立ち上げから行っており、昨年度までに、一度ウィルスの作成を終えたが目的たんぱく質の溶解度に問題があり、コンストラクトを再検討して、ウィルスの作成、および大量培養を行った。CLIP-170の二つのCAP-Glyドメインによる微小管認識機構の解明については、相互作用の相手がα,β-tubulinであることから、複合体の構造解析が難航しているが、本研究中に発見した、CLIP-170のCAP-Glyドメインとある種のリン脂質との複合体の構造解析については、複合体構造解析に有用なNMRのスペクトルが得られた。よって、他のたんぱく質のCAP-Glyドメインと、このリン脂質との相互作用を網羅的に検討するため、他の10種類のたんぱく質のCAP-Glyドメインのコンストラクトを作成、培養、精製を行い、NMRを用いた結合実験を行った。この他、微小管ダイナミックスの制御に関与するCLIP-170の周辺たんぱく質の構造解析に向けて、コンストラクトの作成、培養、精製、および、より良い性質のたんぱく質を得るため、NMRでのシグナル測定を用いて、溶液条件の検討および、リコンストラクトなどを行い、構造解析に向けての研究を行った。

In CLIP- 170, the micro-management organization and the CLIP-170-based self-inhibition mechanism were used to explain the performance of the research program. NMR uses the information system to analyze and determine the performance of the market in the last year. Special CAP-Gly1,2 α, β-tubulin interaction, molecular weight, high molecular weight, high molecular weight, The egg whites and bacteria were used to detect the protein and the essence was detected and tested. The Sf9 of the insect cells was used to culture the bacteria. This year, the Institute of Biochemistry of Capital University and the Institute of Biochemistry of Capital University have been selected for joint research. This year, the Institute of Biochemistry of Capital University has established a laboratory of biochemistry in Beijing. Sf9, capital university, capital In CLIP- 170, two-year CAP-Gly communication technology is used to understand how to interact and interact with each other. In this study, β-tubulin, NMR, β-DNA, β-DNA and complex were analyzed. In this paper, we use the CAP-Gly information system, the information system interaction network system, the other information system, the CAP-Gly system, and the other information system to make, train, train, and use NMR to combine the information of the network. The microtubule, microtubule, microtub The purpose of this paper is to make an analysis to the study of the line.