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生物時計の進化にともなう時計タンパク質KaiBの構造と機能の変化

随着生物钟的进化，时钟蛋白 KaiB 的结构和功能发生变化

基本信息

批准号：
11J40160
负责人：
村上怜子
金额：
$ 1.54万
依托单位：
Nagoya University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for JSPS Fellows
财政年份：
2011
资助国家：
日本
起止时间：
2011 至 2013
项目状态：
已结题

项目摘要

生物時計は、昼夜の変化に適応するために、様々な活性を24時間周期で自律的に振動させる細胞内分子機構である。藍色細菌の生物時計はKaiA、KaiB、KaiCからなっており、ATP存在下においてこれらの3つのタンパク質が相互に作用しあうことで自律的な時間振動を生み出すことができる。KaiBは進化の初期では2量体であり、藍色細菌において時計として進化した結果、4量体を形成するようになったのだと考えられる。4量体構造と機能の関わりを検証するために、C末端酸性残基(95-108)を欠失させた変異体KaiB、KaB_<1-94>を作製した。KaiB_<1-94>は2量体と見積もられた。KaiB_<1-94>はin vitroで野生型と同様にリズム発振する機能があることが示された。原子間力顕微鏡(AFM)を用いた解析によって、KaiB_<WT>のオリゴマー構造を検証した。AFM解析は、鋭い探針によって試料表面を走査し上下方向への変位を計測することにより、試料表面の凹凸形状の評価を行う手法である。この結果、KaiB_<WT>では3つのタイプの粒子が観察された。この結果は、KaiB_<WT>が4量体-2量体-単量体の平衡状態にある可能性を示唆する。この結果およびKaiB_<1-94>がin vitroでリズムを発振できるという結果を踏まえると、2量体もしくは単量体構造のKaiB<WT>がKaiCと複合体を形成するのではないかというモデルが示唆された。また、蛍光相関分光法(FCS法)により、時間振動中のKaiAとKaiBの複合体形成を詳細に調べた。KaiAとKaiBはともに、KaiCのリン酸化状態によってKaiCの結合親和性が変わり、異なる複合体形成の位相を示すことが明らかになった。

Biochronology, circadian rhythm, activity, 24-time cycle, autonomous vibration, intracellular molecular machinery Blue bacteria biochronometer KaiA, KaiB, KaiC, ATP in the presence of the three elements of the interaction, self-regulation of the time vibration generated by the two elements. KaiB is the initial stage of evolution, the blue bacteria is the result of evolution, and the four organisms are formed. 4. Molecular structure and function are related to the identification of C-terminal acidic residues (95 - 108) and the control of heterologous KaiB and KaB.<1-94>KaiB_<1-94>KaiB_in vitro is the same as wild type.<1-94>Atomic Force Microscopy (AFM) is used to analyze and verify the structure of KaiB.<WT>AFM analysis, sharp probe to inspect the sample surface, measurement of vertical position, evaluation of uneven shape of sample surface This result, KaiB_3<WT>These results indicate the possibility of KaiB_g 4 - 2-unit equilibrium.<WT>The result is that KaiB_g is in vitro, and KaiC_g is in complex.<1-94><WT>The complex formation of KaiA and KaiB in temporal vibration was carefully tuned by FCS method. KaiA, KaiB, KaiC, KaiB, KaiC, Kai